[发明专利]抗人血清白蛋白单域抗体的制备及其应用

说明书

本发明属于生物医药领域，尤其涉及一种抗人血清白蛋白单域抗体及其制备和用途。本发明最终得到具有良好特异性、较高亲和力和稳定性的单域抗体，该单域抗体能特异性的识别人血清白蛋白，延长生物药物的半衰期，有利于生物药在治疗中的有益效果。

技术领域

本发明属于生物医药领域，尤其涉及到一种抗人血清白蛋白单域抗体的制备及其应用。

背景技术

药代动力学是蛋白质类药物的一个关键参数。通常情况下更长的血清半衰期意味着多肽和蛋白质类药物能够使用更低的剂量并实现更好的治疗效果。目前已有多种技术方法被用来实现此类药物的半衰期延长，包括蛋白质的聚乙二醇化，与IgG-Fc片段融合，以及与人血清白蛋白融合表达。人血清白蛋白(HSA)由于其半衰期长(19天的血清半衰期)，稳定性好，无免疫原性等特点，已被成功的用于多种融合构建中，包括Factor VIII，Factor IX等。然而，共价形式的人血清白蛋白融合蛋白由于其分子量较大，表达水平低，纯化工作困难等原因一定程度上限制了其广泛应用。另一方面，结合人血清白蛋白的单域抗体(VHH抗体)片段可以通过与血清白蛋白的结合，利用游离型和结合型抗体在血浆内形成平衡的特点，实现缓释和长效的作用。而其在增加治疗相关蛋白和多肽的半衰期的应用已通过很多研究及临床试验得到证实。

单域抗体最早是将骆驼及羊驼体内天然存在的缺失轻链的重链抗体可变区序列分离而得的抗体片段。它只包含一个重链可变区序列，是具有完整抗原结合功能的最小抗体片段。自上世纪80年代被发现以来，基于软骨鱼类以及人类重链的单域抗体也被陆续开发，并在诊断试剂和治疗型抗体等领域得到了越来越广泛的应用。比利时的埃博灵克斯公司最早将单域抗体用于治疗型抗体开发，其中有多款产品是用以抗人血清白蛋白为长效因子而构建的融合蛋白。通过这种设计在保持了小分子量、结构简单的分子构型的同时实现了长效性的功能，为治疗型单域抗体的开发提供了必要的基础。

尽管已有埃博灵克斯公司开发的此类单域抗体应用于长效性蛋白药物开发，但对此类抗体的差异性开发包括针对不同结合表位或是不同亲和力的抗体的获得都会对以此为基础的长效性平台系统开发提供更多的选择。此外，由于开发方案的不同，可能通过不同的免疫动物和优化的筛选方法得到性质更为改善的单域抗体，以更好地实现预期的功能。本发明通过周期性的免疫骆驼，促进其产生针对靶抗原的特异性抗体，同时利用噬菌体展示技术和多轮液相淘选，最终得到具有良好特异性、较高亲和力和稳定性的抗人血清白蛋白的单域抗体，该单域抗体能有效延长生物药物的半衰期，有利于生物药在治疗中的有益效果。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的问题，提供一种具有良好特异性、较高亲和力和稳定性的抗人血清白蛋白单域抗体，该单域抗体能有效延长生物药物的半衰期，有利于生物药在治疗中的有益效果。

本发明的第一方面，提供了一种抗人血清白蛋白的单域抗体，所述单域抗体的重链可变区包含三个互补决定区，分别为CDR1、CDR2、CDR3，其中：CDR1的氨基酸序列为SEQ IDNO：1所示的序列，CDR2的氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示的序列，CDR3的氨基酸序列为SEQID NO：3所示的序列。

进一步的，本发明所述单域抗体具有选自SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5的氨基酸序列。

本发明第二方面，提供了一种核酸分子，所述核酸分子能编码本发明第一方面所述氨基酸序列为SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5的单域抗体。

进一步的，所述核酸分子具有选自SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7的核苷酸序列。

本发明第三方面，提供了一种融合蛋白，所述融合蛋白为使用本发明第一方面中任一所述的氨基酸序列与一个或一个以上具有治疗功能的多肽分子或片段融合在一起制备所得。

进一步的，所述融合蛋白由各功能多肽直接融合；或通过接头肽连接的含1个或者1个以上治疗功能多肽分子的融合蛋白。