[发明专利]一种抗菌肽及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种抗菌肽的制备方法，其特征在于包含如下步骤：

（1）制备混合菌株发酵母液：将奶粉和水混合，得到质量百分比为8～20%的还原乳，将其乳化均质，然后灭菌，冷却；无菌条件下将副干酪乳杆菌菌悬液和马克斯克鲁维酵母菌悬液接入冷却后的还原乳中，25～42℃恒温静置培养2～4天，得到发酵母液；

（2）以发酵母液制备乳清：将奶粉和水混合，得到质量百分比为5～20%的还原乳，将其乳化均质，然后灭菌，冷却；无菌条件下将步骤（1）制得的发酵母液接入冷却后的还原乳中，然后25～42℃发酵培养2～30天，得到含有乳清的发酵液；

（3）超滤分离乳清制得抗菌肽：将步骤（2）制得的含有乳清的发酵液过滤，收集滤液，再经截留分子量为3000～150000道尔顿的超滤膜超滤，得到抗菌肽的粗提取液；

（4）凝胶层析纯化目的抗菌肽：以葡聚糖凝胶SephadexG-25为基质，以磷酸盐缓冲溶液作为洗脱液，将步骤（3）制得的抗菌肽的粗提取液上柱纯化，得到抗菌肽；

步骤（1）中所述的副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）于2016年12月26日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.13498；

步骤（1）中所述的马克斯克鲁维酵母（Kluyveromyces marxianus）于2016年12月26日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.13499。

2.根据权利要求1所述的抗菌肽的制备方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的副干酪乳杆菌菌悬液的初始浓度为10^-7～10^-10cfu/ml；

步骤（1）中所述的副干酪乳杆菌菌悬液的接种量为体积百分比2～10%。

3.根据权利要求1所述的抗菌肽的制备方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的马克斯克鲁维酵母菌悬液的初始浓度为10^-7～10^-10cfu/ml；

步骤（1）中所述的马克斯克鲁维酵母菌悬液的接种量为体积百分比2～10%。

4.根据权利要求1所述的抗菌肽的制备方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的静置培养的温度为25～37℃；

步骤（1）中所述的静置培养的时间为2～3天。

5.根据权利要求1所述的抗菌肽的制备方法，其特征在于：

步骤（2）中所述的发酵培养的温度为25～37℃；

步骤（2）中所述的发酵培养的时间为7～28天。

6.根据权利要求1所述的抗菌肽的制备方法，其特征在于：

步骤（3）中所述的超滤膜的截留分子量为3000～10000道尔顿。

7.根据权利要求1所述的抗菌肽的制备方法，其特征在于：

步骤（4）中所述的上柱纯化的流速为0.5～10ml/min。

8.一种抗菌肽，其特征在于通过权利要求1～7任一项所述的制备方法制备得到。

9.权利要求8所述的抗菌肽在制备预防和治疗痤疮产品中的应用。