[发明专利]一种抗菌肽及其制备方法与应用

说明书

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种抗菌肽及其制备方法与应用。所述的抗菌肽是通过副干酪乳杆菌和马克斯克鲁维酵母混合菌株对牛奶进行发酵制得，主要包括以下步骤：(1)制备混合菌株发酵母液；(2)接种发酵母液进行低温长时间发酵制备乳清；(3)采用超滤技术分离乳清制得含抗菌肽的粗提取液；(4)通过凝胶层析纯化目的抗菌肽。本发明制得的抗菌肽热稳定性好，对人体无刺激作用且抗菌谱广，尤其对痤疮丙酸杆菌有显著抑制作用，可替代抗生素，有效减少抗生素的使用，可用于预防和治疗痤疮。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种抗菌肽及其制备方法与应用。

背景技术

痤疮俗称青春痘，是一种与性腺内分泌功能失调有关的慢性炎症性皮肤病。其常见于青春期，可挤出淡黄色的脂栓，表现为黑白粉刺、丘疹、脓疱、结节、囊肿及瘢痕等皮损。这种皮肤病会影响美观，严重时甚至会导致容貌损毁，因此会给患者带来巨大的心理负担和精神压力。痤疮的病因及发病机理也较为复杂，主要与痤疮丙酸杆菌感染、雄激素、皮脂分泌增加和毛囊皮脂腺开口处过度角化等四大原因相关，而痤疮丙酸杆菌已经成为了痤疮的最主要诱导因素之一。

痤疮丙酸杆菌隶属放线菌目，丙酸杆菌科、属、痤疮丙酸杆菌种，是一种革兰氏阳性、厌氧、不运动的短杆菌。其广泛存在于空气、土壤、水体和动物体中尤其是人的皮肤中。痤疮丙酸杆菌会分泌可分解皮肤角质及类脂成分的酯酶，以及会增强炎症反应的三酰甘油等代谢产物，从而导致痤疮的产生。其常侵入毛囊及表皮深部、厌氧、生长缓慢等理化特性也使其不易被清除，而成为条件致病菌。

目前使用抗生素是一种治疗痤疮的重要方法，主要的抗菌药物有四环素类、大环内酯类、克林霉素、复方新诺明和喹诺酮类等。但是近年来，因为抗生素使用不规范，痤疮丙酸杆菌的耐药性也越来越强，因此抗生素的安全性也受到了越来越多的质疑。如果能研制一种可以代替抗生素来抑制痤疮丙酸杆菌的物质，这将成为许多痤疮患者的福音。

发明内容

为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的首要目的在于提供一种抗菌肽的制备方法，该方法操作简便，易于大规模工业化生产，原料均为可食性材料，绿色、健康、安全性极高。

本发明的另一目的在于提供上述制备方法制备得到的抗菌肽，该抗菌肽的热稳定性好，对正常动物无刺激作用，对痤疮丙酸杆菌有显著抑制作用。

本发明的再一目的在于提供上述抗菌肽的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种抗菌肽的制备方法，包含如下步骤：

(1)制备混合菌株发酵母液：将奶粉和水混合，得到质量百分比为8～20％的还原乳，将其乳化均质，然后灭菌，冷却；无菌条件下将副干酪乳杆菌菌悬液和斯克鲁维酵母菌悬液接入冷却后的还原乳中，25～42℃恒温静置培养2～4天，得到发酵母液；

(2)以发酵母液制备乳清：将奶粉和水混合，得到质量百分比为5～20％的还原乳，将其乳化均质，然后灭菌，冷却；无菌条件下将步骤(1)制得的发酵母液接入冷却后的还原乳中，然后25～42℃发酵培养2～30天，得到含有乳清的发酵液；

(3)超滤分离乳清制得抗菌肽：将步骤(2)制得的含有乳清的发酵液过滤，收集滤液，再经截留分子量为3000～150000道尔顿的超滤膜超滤，得到抗菌肽的粗提取液；

(4)凝胶层析纯化目的抗菌肽：以葡聚糖凝胶SephadexG-25为基质，以磷酸盐缓冲溶液作为洗脱液，将步骤(3)制得的抗菌肽的粗提取液上柱纯化，得到抗菌肽；

步骤(1)中所述的还原乳的质量百分比优选为8～15％；

步骤(1)中所述的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)(编号为SLBC16-4)于2016年12月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.13498；