[发明专利]一种类芽孢杆菌甲壳素酶及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201811315033.X | 申请日： | 2018-11-06 |
| 公开（公告）号： | CN109652396A | 公开（公告）日： | 2019-04-19 |
| 发明（设计）人： | 娄文勇;徐培;宗敏华;程建华;杨继国 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12N9/42 | 分类号： | C12N9/42;C12N15/56;C12N15/70;C12P19/26;C12P19/14 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 何淑珍;冯振宁 |
| 地址： | 510640 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 甲壳素酶 芽孢杆菌 蟹壳粉 类芽孢杆菌 制备方法和应用 大肠杆菌表达系统 离子液体预处理 预处理 氨基酸序列 可溶性表达 工业应用 核酸序列 离子液体 酶解效率 未处理 催化剂 酶解 基因 应用 | ||
1.一种类芽孢杆菌甲壳素酶，其特征在于，所述类芽孢杆菌甲壳素酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2 所示。
2.根据权利要求1所述的一种类芽孢杆菌甲壳素酶，其特征在于，编码该类芽孢杆菌甲壳素酶的基因的核酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.制备权利要求1所述的一种类芽孢杆菌甲壳素酶的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
将核酸序列如SEQ ID NO.1 所示的甲壳素酶基因与表达载体连接，构建重组载体，然后将重组载体转入表达菌株中，诱导并获得可胞内可溶性表达的类芽孢杆菌甲壳素酶。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述表达载体为pET-22b、pET-28a及pET-30a中的一种。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述表达菌株为大肠杆菌BL21(DE3)。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述诱导是在添加了0.1-1.0 mMIPTG的LB液体培养基中，温度为16-30℃下诱导16-24h。
7.权利要求1所述的一种类芽孢杆菌甲壳素酶的应用，其特征在于，包括以下步骤：
利用离子液体对蟹壳粉进行预处理，然后以预处理后的蟹壳粉为底物，纯化的类芽孢杆菌甲壳素酶为催化剂，酶解制备具有还原性的可溶性甲壳寡糖。
8.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述离子液体为1-烯丙基-3-乙基咪唑氯盐、1-丁基-3-甲基咪唑氯盐、1-丁基-3-甲基咪唑醋酸盐和1-乙基-3-甲基咪唑醋酸盐中的一种以上。
9.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述预处理条件为：固液比为1-4wt%，预处理温度为80-140℃，时间为0.5-3h。
10.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述酶解的体系为：0.1-0.2mg类芽孢杆菌甲壳素酶，10-30mg预处理的蟹壳粉，pH5.0 0.2 M柠檬酸缓冲液，酶解时间为1-24h。
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