[发明专利]一种烟草中残留抑芽丹的水热提取方法及液相色谱串联质谱测定方法

说明书

本发明涉及一种烟草中残留抑芽丹的水热提取方法及液相色谱串联质谱测定方法，属于烟草中农药残留检测技术领域。所述水热提取方法包括下述步骤：将烟末样品与盐酸在100~150℃条件下于萃取1~3h，冷却至室温后离心，然后将上清液过柱净化，再用水洗脱即得；其特征在于：萃取时所用设备为水热反应釜。本发明的优点在于：提取方法在水热反应釜中进行，操作简单、快速，提取效率高，安全性好，并大大提高了样品处理通量，且与国际标准方法的测定结果一致性好，适用于烟草样品中抑芽丹残留的充分提取和测定。且本发明在测定抑芽丹残留量时采用抑芽丹空白烟草样品进行基质配标，可使测定结果更为准确。

技术领域

本发明涉及一种烟草中残留抑芽丹的水热提取方法及液相色谱串联质谱测定方法，属于烟草中农药残留检测技术领域。

背景技术

抑芽丹，又称青鲜素、马来酰肼、顺丁烯二酰肼，是一种植物生长调节剂，被广泛应用于烟草以抑制腋芽生长。虽然现今并无确切的研究成果证明抑芽丹的使用能够诱发癌症，但已经证实大剂量地使用抑芽丹会导致基因突变。在CORESTA制定的指导性残留限量（GRLs）和我国烟草总公司企业标准《YQ 50-2014烟叶农药最大残留限量》中，对抑芽丹在烟草中的最大残留限量均定为80mg/kg。抑芽丹施用于烟草后，可经叶面角质层吸收而进入植株，其中一部分作为游离态存在，另一部分则以糖苷结合态以及与木质素结合的形式存在。结合态的抑芽丹很难被直接萃取，因此，有效地提取烟草中残留的抑芽丹是对其准确测定的前提。

目前报道的烟草中残留抑芽丹残留的提取方法最早为国际标准方法ISO 4876-1980（ISO方法）的水蒸气蒸馏法，该方法将样品在碱液中煮沸后，加入锌粒，由新生态氢将抑芽丹还原成丁二酸酰肼，并随后水解，水蒸气蒸馏释放出联氨，分光光度法测定其与4-二甲基氨基苯甲醛形成的黄色化合物。本方法的提取效率较高，能同时提取游离态和结合态的抑芽丹，但该前处理方法较老旧，过程复杂，涉及试剂种类多、用量大，且强碱的大量使用对提取所用玻璃仪器腐蚀严重。近年来，开发了许多以酸化甲醇直接提取、混合有机溶剂直接提取、盐酸溶液加热回流提取、盐酸溶液微波辅助萃取的前处理方法从原理上对国际标准的前处理方法进行改进。相比之下，盐酸溶液可有效促进糖苷结合态抑芽丹的水解，回收率较高，因此应用也最为广泛。但这些基于盐酸溶液提取的前处理方法中需要加热回流装置或者微波萃取装置，且对与木质素结合的抑芽丹的提取效率存疑。

另一方面，关于烟草中残留抑芽丹残留的测定方法包括紫外可见分光光度法、气相色谱质谱法、液相色谱法和液相色谱串联质谱法。随着液相色谱-串联质谱法在农药残留检测领域的普及，采用灵敏度更高和抗干扰能力更好的液相色谱-串联质谱法，实现对烟草及烟草制品中抑芽丹残留量的准确定性和定量检测。

发明CN201710785509.5公开了一种烟草中抑芽丹的磁力加热搅拌萃取及液相色谱串联质谱检测方法，该方法测定结果与ISO方法相当，对抑芽丹的提取较为完全，但该方法需要使用磁力加热搅拌器和油浴锅，且需在耐高温玻璃容器中密封进行，瓶内的较高的蒸汽压力会导致爆瓶危险，且一套磁力加热搅拌器一次仅处理一个样品。工作效率低。此外，在检测方面，CN201710785509.5中使用的标准工作溶液为纯溶剂匹配的标准工作溶液，未采用空白基质配标，也使得测定结果有一定偏差。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种烟草中残留抑芽丹的水热提取方法，以解决现有技术烟草中残留抑芽丹的提取过程复杂的技术问题。

本发明的第二个目的在于提供一种烟草中残留抑芽丹的液相色谱串联质谱测定方法。

为实现上述目的，本发明的技术方案是：一种烟草中残留抑芽丹的水热提取方法，包括以下步骤：将烟末样品与盐酸在100~150℃条件下于萃取1~3h，冷却至室温后离心，然后将上清液过柱净化，再用水洗脱即得；其中：萃取时所用设备为水热反应釜。

所述过柱为过C₁₈固相萃取柱。