[发明专利]拉沙病毒快速荧光PCR检测试剂盒及其引物探针组合

权利要求书

1.一种拉沙病毒快速荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：包括扩增试剂和对照试剂，所述的扩增试剂由混合含RT-PCR反应液的检测试剂和16孔微流控芯片组成；所述的对照试剂包含阴性对照和阳性对照；

所述的检测试剂成分为Buffer，2.0mM dNTPs，1U/μL Taq DNA聚合酶，2U/μL M-MLV反转录酶、0.3U/μLRRI和拉沙病毒及内标基因检测引物探针。

2.根据权利要求1所述的一种拉沙病毒快速荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的Buffer包括10mM Tris-HCl，15mM KCl，3.5mM MgCl₂。

3.根据权利要求1所述的一种拉沙病毒快速荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的Taq DNA聚合酶选自Ex Taq HS、Platinum II Taq HS DNA polymerase、AmpliTaq GoldDNA polymerase中的任意一种；所述的反转录酶选自PrimerScript II RTase、PrimerScript RTase、Superscript IV中的任意一种。

4.一种根据权利要求1-3中任意一项所述的一种拉沙病毒快速荧光PCR检测试剂盒的引物探针组合，其特征在于：

拉沙病毒和内标基因检测引物和探针的具体序列和序号如下：

拉沙病毒上游引物F：TGCTCTCAAAACYGATGYGTTCA SEQ ID NO.1

拉沙病毒下游引物R：GARATAACCCCTCACTGTGCA SEQ ID NO.2

拉沙病毒探针P：5’-荧光报告基团-CCTCCTGACACTGCTGCRTCAAACAT-荧光淬基团-3’SEQID NO.3

内参基因β-actin基因上游引物F：CGAGCGCGGCTACAGCT SEQ ID NO.4

内参基因β-actin基因下游引物R：TCCTTAATGTCACGCACGATTT SEQ ID NO.5

内参基因β-actin基因探针P：5’-荧光报告基团-ACCACCACGGCCGAGCGG-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.6。

5.根据权利要求4中所述的一种拉沙病毒快速荧光PCR检测试剂盒的引物探针组合，其特征在于：所述的荧光报告基团选自FAM、HEX、ROX、CY3、CY5荧光报告基团，所述的荧光淬基团选自BHQ1、BHQ2、TAMRA、MGB荧光淬灭基团。

6.根据权利要求5中所述的一种拉沙病毒快速荧光PCR检测试剂盒的引物探针组合，其特征在于：拉沙病毒和内标基因5’端分别标记FAM和CY5荧光素，3’端分别标记BHQ1和BHQ2荧光素。

7.根据权利要求4中所述的一种拉沙病毒快速荧光PCR检测试剂盒的引物探针组合，其特征在于：每个芯片反应孔内目标病原体检测引物探针浓度比例为500nM～1200nM：300nM～600nM。

8.根据权利要求7中所述的一种拉沙病毒快速荧光PCR检测试剂盒的引物探针组合，其特征在于：每个芯片反应孔内目标病原体检测引物探针浓度比例为800nM：400nM。

9.根据权利要求4中所述的一种拉沙病毒快速荧光PCR检测试剂盒的引物探针组合，其特征在于：内参基因引物探针浓度比例为200nM～500nM：100nM～300nM。

10.根据权利要求9中所述的一种拉沙病毒快速荧光PCR检测试剂盒的引物探针组合，其特征在于：内参基因引物探针浓度比例为400nM：200nM。