[发明专利]拉沙病毒快速荧光PCR检测试剂盒及其引物探针组合

说明书

本发明公开一种拉沙病毒快速荧光PCR检测试剂盒及其引物探针组合，所述的试剂盒，包括扩增试剂和对照试剂，所述的扩增试剂由混合含RT‑PCR反应液的检测试剂和16孔微流控芯片组成；所述的对照试剂包含阴性对照和阳性对照；所述的检测试剂成分为Buffer，2.0mM dNTPs，1U/μL Taq DNA聚合酶，2U/μL M‑MLV反转录酶、0.3U/μLRRI和拉沙病毒及内标基因检测引物探针。其解决现有技术中呼拉沙病毒检测灵敏度低、检测周期长、检测通量低的问题。

技术领域

本发明属于生物技术应用领域，涉及拉沙病毒检测试剂盒，具体涉及一种拉沙病毒快速荧光PCR检测试剂盒及其引物探针组合。

背景技术

拉沙热病原为沙状病毒科的一种，是单链核糖核酸(RNA)病毒，拉沙热病毒是沙粒病毒科沙粒病毒属成员。病毒颗粒从圆形到多形，有囊膜，病毒包膜表面有T型突起，长度7-10nm，由病毒糖蛋白组成。病毒基因组RNA以环状核衣壳的形式存在于病毒粒子中，长度在400nm-1300nm之间。病毒粒子内部通常含有电子致密颗粒，在电镜下呈沙粒状红色，沙粒病毒就是因此而得名的，其电子致密颗粒是宿主的核糖体组分。

80％左右的人感染为无症状，其余病例为严重的多系统疾病，病毒侵袭身体的若干器官，如肝、脾和肾，拉沙热的潜伏期为6-21天。该病通常为渐进性发病，开始时出现发烧、全身虚弱和不适。几天后可能出现头痛、喉咙痛、肌肉疼痛、胸痛、恶心、呕吐、腹泻、咳嗽以及腹痛。严重者可发展到出现脸部肿胀，胸腔积水，口、鼻、阴道或胃肠道出血，以及低血压。也可能出现蛋白尿。晚期可见休克、癫痫发作、震颤、定向障碍和昏迷。25％的患者出现耳聋、其中半数在1-3个月后恢复某些功能。在恢复期间可出现短暂脱发和步履不稳。对于其发病率和死亡率，一些研究表明，在整个西非每年发生30万至50万拉沙热病例和5000人死亡。总病死率为1％，但在住院患者中最高达15％。致命病例发病14天内通常发生死亡。该病在妊娠后期尤其严重，在妊娠末3个月期间超过80％的病例发生孕产妇死亡和(或)胎儿死亡。

由于拉沙热的症状如此各不相同和非特异性，往往难以进行临床诊断，尤其在病程初期。拉沙热很难与引起发烧的许多其它疾病区分，包括疟疾、志贺菌病、伤寒、黄热病和其它病毒性出血热。

发明内容

本发明的目的是提供一种拉沙病毒快速荧光PCR检测试剂盒及其引物探针组合，其解决现有技术中呼拉沙病毒检测灵敏度低、检测周期长、检测通量低的问题。

为了实现上述目的，发明的技术方案如下：一种拉沙病毒快速荧光PCR检测试剂盒，包括扩增试剂和对照试剂，所述的扩增试剂由混合含RT-PCR反应液的检测试剂和16孔微流控芯片组成；所述的对照试剂包含阴性对照和阳性对照；

所述的检测试剂成分为Buffer，2.0mM dNTPs，1U/μL Taq DNA聚合酶，2U/μL M-MLV反转录酶、0.3U/μLRRI和拉沙病毒及内标基因检测引物探针。

进一步的，所述的Buffer包括10mM Tris-HCl，15mM KCl，3.5mM MgCl₂。

再进一步的，所述的Taq DNA聚合酶选自Ex Taq HS、Platinum II Taq HS DNApolymerase、AmpliTaq Gold DNA polymerase中的任意一种；所述的反转录酶选自PrimerScript II RTase、PrimerScript RTase、Superscript IV中的任意一种。

基于上述试剂盒，本发明公开一种拉沙病毒快速荧光PCR检测试剂盒的引物探针组合，

拉沙病毒和内标基因检测引物和探针的具体序列和序号如下：

拉沙病毒上游引物F：TGCTCTCAAAACYGATGYGTTCA SEQ ID NO.1