[发明专利]与肝移植术后排斥反应相关的miRNA标志物及其应用

说明书

本发明公开了一种与肝移植术后排斥反应相关的miRNA标志物及其应用，该miRNA标志物选自miR‑3546、miR‑3584‑3p、miR‑199a‑3p、miR‑203a‑3p、miR‑331‑3p和miR‑143‑3p中的至少一种。本发明还公开了检测该miRNA标志物的试剂盒及其应用。本发明的提供的miRNA标志物能够对肝移植急性排斥反应起到预警作用，为临床中非侵入性检测肝移植急性排斥的方法提供策略。

技术领域

本发明涉及一种与肝移植术后排斥反应相关的miRNA标志物及其应用，属于医学分子生物学领域。

背景技术

肝移植已被公认为治疗终末期肝脏疾病的首选治疗方案，而我国是肝病高发区，中国已成为仅次于美国的第二肝移植大国。目前移植后的免疫排斥反应是肝移植病人面临的重要问题，急性排斥反应是最常见的一种移植排斥反应，如果发生急性排斥后治疗效果不佳，移植物会在1年之内完全失去功能。

肝脏具有双重的血液供应系统，且肝窦内皮细胞的间隙大，肝脏Kupffer细胞还可以吞噬抗原抗体复合物，因此，在移植器官当中，其具有一定程度的天然免疫耐受性，故尚无明确的针对急性排斥反应早期检测的方法。目前寻找早期检测指标、明确其机制作用，并进行早期诊断和干预已成为该领域研究的焦点。

MicroRNA(miRNA)是一类仅18～25个核苷酸的单链非编码小分子RNA。成熟的miRNA及其二聚体，通过完全或不完全碱基互补配对原则与特定靶基因的mRNA的3'或5'UTR区结合，起到抑制mRNA翻译或直接降解其特定mRNA的作用。miRNA可以调节自身稳态、参与胚胎发育，也可参与肿瘤、病毒感染、炎症及免疫反应等生物学过程。有研究指出，miRNA具有调节免疫细胞的功能，是至关重要的免疫调节因子，也是免疫平衡调节中重要的参与者，近年来miRNA在移植领域的研究取得了阶段性的成果。

虽然关于miRNA在免疫学领域以及移植领域的研究已经颇为广泛，miRNA在肝脏疾病方面的研究也被认为是可能成为肝脏病学走向个性化研究的基础，但miRNA作为一种新型生物学标志物，其在肝脏移植领域的相关报道相对其他脏器移植较少。在肝脏移植方面，没有与急性排斥相关miRNA的研究。

发明内容

为了解决上述技术问题的至少一种，本发明的一方面提供一种与对象肝移植术后排斥反应相关的miRNA标志物，该miRNA标志物包括选自miR-3546、miR-3584-3p、miR-199a-3p、miR-203a-3p、miR-331-3p和miR-143-3p中的至少一种miRNA，来自对象的样本中如果出现miRNA标志物水平升高，则表示对象出现排斥反应或者具有出现排斥反应的风险。

在本发明的一个优选实施方案中，所述miRNA标志物为1种，即miR-199a-3p。

在本发明的实施方案中，所述对象为哺乳动物。在本发明的优选实施方案中，所述对象为人。

在本发明的实施方案中，所述样本为血清样本。

本发明的第二方面提供一种用于预测对象肝移植术后排斥反应的试剂盒，包括检测miR-3546、miR-3584-3p、miR-199a-3p、miR-203a-3p、miR-331-3p和miR-143-3p中至少一种miRNA的试剂。

在本发明的具体实施方案中，所述试剂为特异性引物，其中用于检测miR-3546的特异性引物序列如SEQ ID NO：1所示，用于检测miR-3584-3p的特异性引物序列如SEQ IDNO：2所示，用于检测miR-199a-3p的特异性引物序列如SEQ ID NO：3所示，用于检测miR-203a-3p的特异性引物序列如SEQ ID NO：4所示，用于检测miR-331-3p的特异性引物序列如SEQ ID NO：5所示，用于检测miR-143-3p的特异性引物序列如SEQ ID NO：6所示。