[发明专利]一种罗非鱼鱼皮免疫调节肽的制备方法

说明书

本发明涉及免疫调节肽制备技术领域，解决了鱼皮中含有的重金属危害人体健康的问题，公开了一种罗非鱼鱼皮免疫调节肽的制备方法。该免疫调节肽的制备方法为先将鱼皮清洗干净，使用吸附剂除去鱼皮中的重金属和杂质颗粒；然后使用无水乙醇对鱼皮进行脱脂处理，利用氢氧化钠除去鱼皮中的杂蛋白，再使用木瓜蛋白酶对鱼皮进行酶解，经过过滤，冷冻干燥得到免疫调节肽。本发明对提前对鱼皮进行吸附处理，除去鱼皮中的重金属，从而得到的免疫调节肽不含危害人体健康的重金属。

技术领域

本发明涉及免疫调节肽制备技术领域，尤其是涉及一种罗非鱼鱼皮免疫调节肽的制备方法。

背景技术

免疫系统对我们的生存至关重要，具有防御病原体的作用，但免疫系统易受到多种因素的影响，包括压力，不健康的生活习惯，病原体和抗原等。已发现的几种具有调节人体免疫应答的药物有环孢菌素，他克莫司，糖皮质激素，叶绿醇，马兜铃酸，白花丹素和左旋咪唑等。然而，由于这些药物的毒副作用和高成本限制了其在患者中的使用，并且大多数免疫调节药物不适用于慢性或预防性用途。研究表明，以食源性蛋白为原料，经商业化蛋白酶水解及分离纯化后得到的寡肽、多肽以及一些蛋白酶水解物混合肽在动物或细胞试验显示出显著免疫调控效果。近年来，研究人员从海洋生物中提取生物活性肽对免疫调节功能进行了大量的研究。在罗非鱼加工过程中丟弃的鱼皮约占下脚料的10％左右，鱼皮中含丰富的胶原蛋白，是提取生物活性肽的优良原料。中国专利公开号CN102217699公开了一种鱿鱼皮蛋白活性肽的制备方法，首先将鱿鱼皮切成块状，加入NaOH水溶液浸泡进行脱色处理，然后加入氢氧化钙浸泡2-4天进行固色，再经水洗至pH中性，过滤，除去不溶性蛋白，提取得到鱼皮蛋白液，最后将该液进行高压处理，得到由于蛋白活性肽，此鱿鱼蛋白活性肽，由于鱼皮中含有重金属汞、铬、镍、锌等有害物质和杂质颗粒，活性多肽制备过程中没有对其进行去除，提取得到的活性肽含有对人体有害的重金属，重金属在人体中长期积累，危害人体健康。

发明内容

本发明是为了克服现有技术从鱼皮提取得到的免疫调节肽含有重金属危害人体健康的问题，提供一种罗非鱼鱼皮免疫调节肽的制备方法，该免疫调节肽中不含重金属汞、铬、镍、锌等有害物质。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种罗非鱼鱼皮免疫调节肽的制备方法，包括以下步骤：

1)将鱼皮用清水清洗干净，浸入质量浓度为0.5-2％醋酸水溶液静置10-20min，取出鱼皮，在鱼皮的表面涂覆吸附剂进行吸附10-20h，使用清水清洗鱼皮，然后将鱼皮剪成碎片；

2)将鱼皮加入无水乙醇中在55-65℃下进行脱脂2-4h，经过水洗后重复脱脂1-2次，将鱼皮加入质量浓度为0.1-0.5％的氢氧化钠水溶液中在室温下浸泡5-12h，水洗至中性，置于-20--18℃下冷冻，备用；

3)将步骤2)中的冷冻鱼皮解冻后按料液比1:8-12g/mL加入水中，在80-90℃下保温1-2h，冷却至55-65℃，调节pH至5.5-6.5，加入木瓜蛋白酶进行酶解30-60min，置于沸水中进行灭活10-15min，冷却至室温，在4-6℃下以10000-12000r/min转速进行离心15-20min，收集上清液；

4)将上清液依次进行超滤、纳滤浓缩处理，然后经过冷冻干燥，即得。

由于水体中含有重金属汞、铬、镍、锌等有害物质，鱼在生长过程中鱼皮与水体长时间接触后，水体中的重金属物质会在鱼皮上积累，所以本发明先使用吸附剂对鱼皮进行吸附处理，吸附鱼皮上的杂质颗粒和重金属有害物质，然后在无水乙醇中进行脱脂处理，使用氢氧化钠除去鱼皮中的杂蛋白，再使用木瓜蛋白酶对鱼皮进行酶解，得到免疫调节肽，最后经过超滤、纳滤得到纯度较高的免疫调节肽，本发明制备的免疫调节肽中不含有重金属，不会对人体健康造成危害。

作为优选，所述步骤2)中鱼皮与无水乙醇的料液比为1:3-5g/mL。

作为优选，所述步骤3)中木瓜蛋白酶的重量为鱼皮重量的4-8％。