[发明专利]过表达circScmh1基因的神经干细胞外泌体及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201811328372.1 | 申请日： | 2018-11-08 |
| 公开（公告）号： | CN109468280B | 公开（公告）日： | 2021-06-25 |
| 发明（设计）人： | 姚红红;杨莉;沈灵;陈碧玲;王广天;吴舒圣;唐天慈;王宇;李吉;李明月;冷硕;叶清清 | 申请（专利权）人： | 东南大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/85;A61K35/30;A61P9/10 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 杨晓莉 |
| 地址： | 210000 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表达 circscmh1 基因 神经 干细胞 外泌体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种过表达作为circRNA的Scmh1基因的神经干细胞外泌体，其特征在于，通过以下方法制备得到：使用无血清培养基培养原代神经干细胞至2代或以后，采用过表达pEGFP-N1质粒转染使原代神经干细胞过表达作为circRNA的Scmh1基因，然后收集细胞上清，依次离心去除漂浮细胞、死细胞、细胞碎片，再次离心收集沉淀，重悬，离心重悬液，收集沉淀得到过表达作为circRNA的schm1基因的神经干细胞外泌体。
2.根据权利要求1所述的过表达作为circRNA的Scmh1基因的神经干细胞外泌体，其特征在于，所述无血清培养基为DMEM/F-12和B27 minus vitamin A。
3.根据权利要求1所述的过表达作为circRNA的Scmh1基因的神经干细胞外泌体，其特征在于，所述pEGFP-N1质粒转染浓度为每1*10^5-1*10^6个神经干细胞，加入1-10ugpEGFP-N1质粒转染，转染12-72小时。
4.根据权利要求1所述的过表达作为circRNA的Scmh1基因的神经干细胞外泌体，其特征在于，转染后收集细胞上清，依次采用300g转速离心5分钟，去除漂浮细胞；收集上清，采用3000g转速离心30分钟，去除死细胞；收集上清，采用10000g转速离心60分钟，去除细胞碎片。
5.根据权利要求1所述的过表达作为circRNA的Scmh1基因的神经干细胞外泌体，其特征在于，离心重悬液是指采用200000g转速离心120分钟。
6.根据权利要求1所述的过表达作为circRNA的Scmh1基因的神经干细胞外泌体，其特征在于，所述重悬采用PBS溶液。
7.权利要求1-6中任一所述过表达作为circRNA的Scmh1基因的神经干细胞外泌体，其特征在于，为粒径40-100的盘状囊泡状结构，作为circRNA的Scmh1基因较对照外泌体过表达8-10倍。
8.权利要求1-6中任一所述过表达作为circRNA的Scmh1基因的神经干细胞外泌体在制备预防或治疗脑卒中药物中的应用。
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