[发明专利]细胞保存液及使用细胞保存液保存细胞的方法

权利要求书

1.一种细胞保存液，包括甲醇、proclin300、EDTA、NaCl、乙酸、白蛋白、葡萄糖、生理盐水以及氯化铬，其特征在于：由如下重量份的组分制备而得：甲醇：15.00％-35.00％、proclin300：0.20％-0.35％、EDTA：0.10％-0.52％、NaCl：0.10％-0.23％、乙酸：53.20％-68.70％、白蛋白：2.30％-25.0％、葡萄糖：0.10％-1.00％，生理盐水0.5-0.9％以及氯化铬0.1％-1％。

2.根据权利要求1所述的一种细胞保存液，其特征在于：由如下重量份的组分制备而得：甲醇：18.00％-33.00％、proclin300：0.28％-0.30％、EDTA：0.22％-0.42％、NaCl：0.15％-0.20％、乙酸：55.38％-60.21％、白蛋白：10.30％-18.91％、葡萄糖：0.34％-0.85％，生理盐水0.7-0.8％以及氯化铬0.1％-0.5％。

3.根据权利要求1所述的一种细胞保存液，其特征在于：由如下重量份的组分制备而得：甲醇：25％、proclin300：0.29％、EDTA：0.39％、NaCl：0.18％、乙酸：58.45％、白蛋白：15.35％、葡萄糖：0.56％、生理盐水0.61％以及氯化铬0.3％。

4.根据权利要求1-3所述的任意一种细胞保存液，其特征在于：向上述细胞保存液中添加质控细胞，质控细胞为Hela细胞，所加入质控细胞的浓度为2×10⁶个/ml，100ul，温度控制在2-8℃的范围内，保存七天后，细胞数量与刚加入细胞时的数量相对偏差不大于40％，上述细胞保存液的PH应控制在4.0-7.0的范围内。

5.使用权利要求1-3所述的任意一种细胞保存液保存细胞的方法，其特征在于，保存细胞包括如下步骤：在细胞采集前24小时，从-20℃冰箱中取出上述细胞保护液，放入4℃冰箱中融化，保存液保存浓度为2×106个/ml的Hela细胞液的细胞数量批内cv值不超过10％，批间cv值不超过15％；

①取部分细胞进行细胞计数，其余细胞离心去上清；以每毫升保存液保存106-107细胞的比例，用上述比例制备的保存液重悬细胞，置于离心管中，轻柔充分混匀细胞和保存液；

②将细胞悬液转移至无菌的离心管中，用封口膜密封；

③将离心管转移至2-6℃冰箱中保存，每天至少观察记录冰箱温度4次，保证冰箱温度控制在2-6℃；

④保存期内的MSCs可随时在无菌环境中取出，在2-6℃条件下低速离心弃上清，收集细胞，供体内外使用；

⑤低温保存不超过14天，需要检测时，用37℃水浴快速恢复温度，即可使用。