[发明专利]一种齿瓣石斛精制多糖及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种齿瓣石斛精制多糖及其制备方法和应用，齿瓣石斛精制多糖的制备方法包括：齿瓣石斛先用水提取，提取液浓缩后添加乙醇醇沉，沉淀用水溶解后脱蛋白，干燥得粗多糖，粗多糖经离子交换柱纯化得到半精制多糖，半精制多糖再经凝胶柱纯化后得到齿瓣石斛精制多糖。该齿瓣石斛精制多糖具有增强免疫，缓解体力疲劳的作用，安全有效，可用于制备增强免疫力和缓解体力疲劳的药物和功能性食品中，还可作为TLR4激动剂在制备添加到疫苗中的免疫佐剂，和TLR4相关的抗肿瘤药物的应用。

技术领域

本发明涉及齿瓣石斛技术领域，具体涉及一种齿瓣石斛精制多糖及其制备方法和应用。

背景技术

TLR4是Toll样受体(TLR)家族中的关键跨膜模式识别受体，主要表达于免疫细胞，也表达于正常上皮细胞和癌细胞。TLR4通过病原体相关分子模式(PAMPs)对包括病毒、细菌、原生动物和真菌在内的各种入侵外源病原体作出反应。此外，它通过危险(或损伤)相关的分子模式(DAMPs)来识别内源性物质。这些内源性物质通常从炎症、氧化、损伤或坏死的细胞中释放，包括β-防御素、β-淀粉样蛋白、过氧化物酶、高迁移率族蛋白1(HMGB1)、热休克蛋白(HSPs)、透明质酸、硫酸肝素、P物质等。这些能力使TLR4成为先天免疫和适应性免疫反应的关键调节因子，并参与许多免疫和其他疾病。因此，TLR4已成为重要的药物靶标。TLR4拮抗剂正在开发用于治疗炎症性疾病，包括哮喘、动脉硬化、2型糖尿病、自身免疫和神经炎性疾病，而TLR4激动剂直接或作为疫苗中的免疫佐剂用于治疗癌症和传染性疾病(例如真菌和寄生虫)。

齿瓣石斛为兰科植物齿瓣石斛(Dendrobium devonianum Paxton.)的干燥茎，又名紫皮石斛、紫皮兰、香棍草、大黄草，收载于《云南省中药材标准》，具有益胃生津，滋阴清热等功效。同时齿瓣石斛收载于《云南省食品安全地方标准》，是目前唯一由行政主管部门发布了食品安全标准的石斛品种，对齿瓣石斛的研究与开发已越来越受到重视。

申请号为201510040088.4(授权公告号为CN104628798B)的中国专利申请公开了从紫皮石斛原料中同时制备花色苷及多糖的方法。所述方法包括以下步骤：1)制备水提液：将新鲜紫皮石斛茎条在水中提取，并进行固液分离，所得液体为水提液；2)浓缩水提液：将水提液蒸发，得到浓缩水提液；3)提取多糖：将乙醇加入浓缩水提液中，静置后进行固液分离，所得固体干燥即为多糖；4)提取花色苷：将步骤3)固液分离所得液体去除乙醇后，再将溶液干燥即得花色苷。所述方法能够简便地将紫皮石斛中的花色苷色素和有功能活性的多糖同时分别提取出，并且得到的花色苷色素和多糖纯度较高；提取过程中能耗较低；该方法既可以提高时效，也可以充分利用资源，具有较好的应用前景。

申请号为201610121973.X(申请公布号为CN106632708A)的中国发明专利申请公开了一种分离提纯齿瓣石斛均一多糖的方法，先用分步醇沉方法进行分离，然后经凝胶柱纯化，能够得到纯净的齿瓣石斛的均一多糖。另外，本发明还采用多光谱解析鉴定了齿瓣石斛均一多糖的骨架结构，能够对该多糖的一级结构准确鉴定，明确齿瓣石斛中的主要多糖为乙酰基葡甘露聚糖。

申请号为201710214362.4(申请公布号为CN107033253A)的中国发明专利申请公开了一种具有免疫促进和降血糖活性的紫皮石斛多糖及其制备方法，通过水提、醇沉、复溶、干燥或水提、超滤、干燥等步骤制备紫皮石斛多糖，其特征：碘-碘化钾试剂不显色，分子量为3×10⁵－5×10⁵Da，单糖组成主要为甘露糖、乙酰化甘露糖(Acetyl-Man)并含少量葡萄糖(Glc)且甘露糖和葡萄糖组成比大于20:1，糖苷键主要为β-1,4-Manp和β-1,4-Glcp。该紫皮石斛多糖具有免疫促进和降血糖作用，可用于治疗免疫低下和高血糖相关产品的开发。

发明内容

本发明的目的是提供了一种齿瓣石斛精制多糖及其制备方法和应用，该齿瓣石斛精制多糖具有增强免疫的作用，还有该多糖作为TLR4激动剂在制备添加到疫苗中的免疫佐剂，和TLR4相关的抗肿瘤药物的应用。