[发明专利]一种表达制备乳二糖磷酸化酶的方法有效
| 申请号： | 201811331201.4 | 申请日： | 2018-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN109234299B | 公开（公告）日： | 2021-08-13 |
| 发明（设计）人： | 李拖平;李苏红;佟超男;孙玥 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/75 | 分类号： | C12N15/75;C12N1/21;C12N9/10;C12R1/125 |
| 代理公司： | 沈阳杰克知识产权代理有限公司 21207 | 代理人： | 胡洋 |
| 地址： | 110000 辽宁省沈*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 制备 乳二糖 磷酸化酶 方法 | ||
1.一种表达制备乳二糖磷酸化酶的方法，其特征在于，方法如下：
1）将乳二糖磷酸化酶基因与表达载体连接，构建重组表达载体；所述表达载体是pHT系列载体、穿梭载体pMA5或穿梭载体pWB980；所述乳二糖磷酸化酶基因的序列如SEQ ID NO:1所示；
2）将重组表达载体电转化至宿主菌中构建重组工程菌；所述宿主菌是枯草芽孢杆菌（
3）将重组工程菌以1-10%的接种量接种于液体培养基中，于180rpm培养至OD600=0.8时，加入IPTG至终浓度为1mM，然后在37℃、120rpm条件下诱导培养9小时，菌液离心，取上清液；所述的液体培养基是含有抗生素的液体培养基。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述pHT系列载体是pHT43、pHT304或pHT01载体。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述表达载体含有蛋白纯化标签。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述蛋白纯化标签是组氨酸 (His-tag)标签。
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