[发明专利]基于混合填料的抗体纯化方法在审
| 申请号： | 201811332080.5 | 申请日： | 2018-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN109336967A | 公开（公告）日： | 2019-02-15 |
| 发明（设计）人： | 富敏霞;周佳豪;张赶;方峰 | 申请（专利权）人： | 杭州奕安济世生物药业有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/00 | 分类号： | C07K16/00;C07K1/20;C07K1/18 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 李青 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市经济技术开*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 混合填料 抗体纯化 目标抗体 阴离子交换层析 疏水层析介质 回收率 蛋白质分离技术 混合填料层 蛋白产生 分离步骤 分离成本 分离效率 吸附容量 高聚体 一步法 粗品 去除 对抗 | ||
1.基于混合填料的抗体纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
利用混合填料层析柱对含目标抗体粗品进行纯化，所述混合填料包括阴离子交换层析介质和疏水层析介质。
2.根据权利要求1所述的基于混合填料的抗体纯化方法，其特征在于，所述阴离子交换层析介质和所述疏水层析介质的体积比为5﹕1～1﹕5；
优选的，所述阴离子交换层析介质和所述疏水层析介质的体积比为3﹕1～1﹕3。
3.根据权利要求1所述的基于混合填料的抗体纯化方法，其特征在于，所述阴离子交换层析介质包括POROS 50HQ、Capto Q和Capto Q ImpRes中的任一种或多种；
优选的，所述阴离子交换层析介质为POROS 50HQ。
4.根据权利要求1所述的基于混合填料的抗体纯化方法，其特征在于，所述疏水层析介质包括Capto Butyl ImpRes、Capto Octyl和Poros Ethyl中的任一种或多种；
优选的，所述疏水层析介质为Capto Butyl ImpRes。
5.根据权利要求1所述的基于混合填料的抗体纯化方法，其特征在于，所述纯化中，采用的平衡缓冲液为Tris-醋酸缓冲液；
优选的，所述平衡缓冲液的pH为7.1-7.9；
更优选的，所述平衡缓冲液的pH为7.3-7.6。
6.根据权利要求5所述的基于混合填料的抗体纯化方法，其特征在于，所述平衡缓冲液为45-55mM Tris-醋酸缓冲液；
更优选的，所述平衡缓冲液为50-55mM Tris-醋酸缓冲液。
7.根据权利要求1所述的基于混合填料的抗体纯化方法，其特征在于，所述混合填料的装柱高度为4.8-6.0cm；
优选的，所述混合填料的装填高度为5.0-5.4cm。
8.根据权利要求1所述的基于混合填料的抗体纯化方法，其特征在于，所述纯化的操作线性流速为80-160cm/h；
优选的，所述纯化的操作线性流速为100-120cm/h。
9.根据权利要求1所述的基于混合填料的抗体纯化方法，其特征在于，所述含目标抗体粗品的制备方法包括：含目标抗体的细胞发酵液，经深层过滤、蛋白A亲和层析，进行病毒灭活，调节pH至7.5±0.5后，进行深层过滤，得到所述含目标抗体粗品。
10.根据权利要求9所述的基于混合填料的抗体纯化方法，其特征在于，所述深层过滤为两级深层过滤；
优选的，所述深层过滤包括分别通过Millipore D0HC和Millipore A1HC进行两级深层过滤。
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