[发明专利]一种适于香菇菌褶担子细胞形态观察的切片制备方法在审
| 申请号： | 201811333249.9 | 申请日： | 2018-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN109374376A | 公开（公告）日： | 2019-02-22 |
| 发明（设计）人： | 万佳宁;章炉军;宋春艳;谭琦;鲍大鹏;尚晓冬;杨瑞恒;周陈力;茅文俊;王瑞娟 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | G01N1/28 | 分类号： | G01N1/28;G01N1/30 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 31233 | 代理人： | 黄志达;魏峯 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 香菇菌 切片 细胞形态 制备 观察 荧光染料染色 安全环保 结构学 染色 生理学 包埋 封片 浸蜡 烤片 脱蜡 展片 脱水 香菇 发育 细胞 清晰 证据 应用 研究 | ||
1.一种适于香菇菌褶担子细胞形态观察的切片制备方法，包括：
(1)选取新鲜香菇菌褶组织作为切片的试验材料；将所选的试验材料切块，放入FAA固定液中于室温下固定；随后将经固定的试验材料脱水；
(2)将经脱水的试验材料置于乙醇与低熔点多聚蜡的混合溶剂中，放置在烘箱中直到乙醇挥发完全；待乙醇挥发后，继续放置12～18h；
(3)对包埋盒及经步骤(2)处理的试验材料进行预热，随后先在包埋盒中加入低熔点多聚蜡，再将试验材料夹入包埋盒中，室温下静置待低熔点多聚蜡完全凝固，将石蜡块取出，进行修蜡和切片；
(4)将步骤(3)得到的切片进行展片，待切片均匀展开后，用涂有粘片剂的载玻片进行捞片；将附着有切片的载玻片进行烤片，随后放入无水乙醇中脱蜡；
(5)向脱蜡后的载玻片滴加染色液进行染色，用PBS缓冲液冲洗，在载玻片中央滴入封片剂，用盖玻片封片，即可。
2.根据权利要求1所述的切片制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的固定时间为16～20h。
3.根据权利要求1所述的切片制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中的脱水具体操作如下：用体积浓度为30％的乙醇冲洗1～2次，然后将试验材料放置于体积浓度为50％乙醇中30min，取出后再依次放置在体积浓度为70％、85％、95％的乙醇中各处理1h，最后放置在纯乙醇中处理2次，每次1h。
4.根据权利要求1所述的切片制备方法，其特征在于：所述步骤(2)和(3)中的低熔点多聚蜡的制备方法如下：将聚乙二醇-400二硬脂酸酯和十六烷醇按照质量比9:1混合，于40℃烘箱中充分熔化制成。
5.根据权利要求1所述的切片制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的乙醇与低熔点多聚蜡的体积比为1:1。
6.根据权利要求1所述的切片制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中在包埋盒中加入低熔点多聚蜡的液面高度为1～1.5cm。
7.根据权利要求1所述的切片制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中的切片厚度为8～10μm。
8.根据权利要求1所述的切片制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中的烤片温度为30～35℃，烤片时间为24～36h。
9.根据权利要求1所述的切片制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中的染色具体为：滴加体积比为0.1％的荧光增白剂VBL染色10min。
10.根据权利要求1所述的切片制备方法，其特征在于：得到的香菇菌褶组织切片置于荧光显微镜下，使用10x目镜、100x物镜，于紫外光下进行观察。
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