[发明专利]一株防治水蜜桃采后褐腐病的间型假丝酵母菌株及其应用

权利要求书

1.一株防治水蜜桃采后褐腐病的间型假丝酵母菌株，保藏名称为:间型假丝酵母C17，Candida intermedia C17；保藏号为CCTCC NO:M 2018584。

2.利用权利要求1所述的防治水蜜桃采后褐腐病的间型假丝酵母菌株制备用于防治水蜜桃采后褐腐病的生防活性冻干粉的方法，其特征在于按照以下步骤进行：

(1)间型假丝酵母(Candida intermedia)C17菌株的活化：从斜面挑取保藏的菌株划线接种于NYDA(Nutrient Yeast Dextrose Agar)琼脂培养基中，28℃恒温培养2-3d；

(2)酵母菌富集培养：挑取步骤(1)中活化好的C17菌株单菌落，接种于NYDB(NutrientYeast Dextrose Broth)液体培养基中(50mL/250mL)，180r/min，28℃恒温震荡培养24h，得到菌株C17的种子液；然后将发酵液以1:100的接种量接入NYDB培养基中，180r/min，28℃恒温震荡培养48h，得到间型假丝酵母(Candida intermedia)C17菌株的细胞培养液；

(3)菌泥的制备：取30mL步骤(2)中富集培养好的酵母菌液，在4℃条件下，6000r/min离心10min，倒掉上清液得到菌体沉淀，备用；

(4)添加冻干保护剂：重悬步骤(3)中酵母细胞沉淀于30mL冻干保护剂溶液中，充分混匀，平衡30min；

(5)分装：将添加保护剂的酵母菌悬液混合均匀后倒入直径9cm的平板中，使厚度约为0.5cm；

(6)预冷冻：将分装好的平板用保鲜膜封口，迅速放入-80℃恒温冰箱中，预冷冻3h；

(7)真空冷冻干燥：将预冷冻完成的平板迅速转移到预冷至-30℃以下的冷冻干燥机中，打开真空泵，冷冻干燥机冷阱温度为-50℃，抽真空冷冻干燥48h；

(8)密封保存：冷冻干燥完成的平板迅速转移到超净工作台内，用保鲜膜和封口膜进行密封。

3.根据权利要求2所述的防治水蜜桃采后褐腐病的生防活性冻干粉的制备方法，其特征在其中步骤(1)中NYDA琼脂培养基组成如下：酵母浸膏5g，牛肉浸膏8g，葡萄糖10g，琼脂20g，补充蒸馏水至1000mL，自然pH，121℃灭菌20min。

4.根据权利要求2所述的防治水蜜桃采后褐腐病的生防活性冻干粉的制备方法，其特征在其中步骤(2)中NYDB培养基组成如下：酵母浸膏5g，牛肉浸膏8g，葡萄糖10g，补充蒸馏水至1000mL，自然pH，121℃灭菌20min。

5.根据权利要求2所述的防治水蜜桃采后褐腐病的生防活性冻干粉的制备方法，其特征在其中步骤(4)中冻干保护剂溶液中含有质量百分浓度为：5.43％山梨醇，12.45％海藻糖和13.56％谷氨酸钠；其余为水。

6.根据权利要求2所述的防治水蜜桃采后褐腐病的生防活性冻干粉的制备方法制备得到的生防活性冻干粉的使用方法，其特征在按照下述步骤进行：使用时将活性冻干粉用无菌水悬浮并调整酵母浓度至1×10⁸cells/mL，将水蜜桃在菌液中浸泡10min后取出，自然晾干，即可显著降低桃果实褐腐发病率和自然腐烂率，并延缓桃果实可溶性固形物，总酸及Vc含量的降低；抑制果实失重率和果皮细胞膜透性的增加；提高多酚氧化酶(PPO)和过氧化物酶(POD)的酶活性。