[发明专利]大菱鲆蛋白质二硫键异构酶A3的重组蛋白及其制备和应用在审
| 申请号： | 201811337156.3 | 申请日： | 2018-11-12 |
| 公开（公告）号： | CN109337890A | 公开（公告）日： | 2019-02-15 |
| 发明（设计）人： | 孙志宾;马爱军;王新安;唐启政 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 |
| 主分类号： | C12N9/90 | 分类号： | C12N9/90;C12N15/61;C12N15/70;C12N9/36 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 266071 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 蛋白质二硫键异构酶 重组蛋白 大菱鲆 制备和应用 变性蛋白 蛋白 分子生物学技术 融合表达载体 技术获得 体外重组 蛋白体 复性率 潜在的 复性 添加剂 基因 应用 开发 | ||
1.一种大菱鲆蛋白质二硫键异构酶的重组蛋白，其特征在于所述的重组蛋白为蛋白质二硫键异构酶A3,简称SmPDIA3,重组蛋白的基因序列为SEQ ID NO.1。
2.权利要求1所述一种大菱鲆蛋白质二硫键异构酶A3的重组蛋白制备方法,其特征在于所述方法的步骤如下:
(1)以大菱鲆SmPDIA3基因编码区为模板，采用P1和P2引物进行PCR扩增，待用；
(2)pET-28a载体以BamH I/Hind III酶切，待用；
(3)将步骤(1)的PCR扩增产物与步骤(2)酶切后的pET-28a载体通过In-Fusion HD酶重组，转化，测序鉴定,提取阳性克隆质粒，完成克隆载体构建；
(4)将步骤(3)构建的载体转入E.coil transettea(DE3)表达菌株中进行诱导表达，而后纯化、浓缩，即得到具有序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列的重组蛋白SmPDIA3；
所述引物P1和P2的序列分别为
P1：5’—AATGGGTCGCGGATCCAGTGATGTGCTGGAGTACACGG—3’；P2：
5’—GTGCGGCCGCAAGCTTTTATAGCTCAATCCTCTTCTTTTTC—3’。
3.权利要求1或2所述大菱鲆蛋白质二硫键异构酶A3蛋白的重组蛋白的应用，所述重组蛋白SmPDIA3在制备变性蛋白复性中的应用。
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