[发明专利]新型鹅星状病毒、鹅副黏病毒、鹅细小病毒多重荧光定量PCR检测引物、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种新型鹅星状病毒、鹅副黏病毒、鹅细小病毒多重荧光定量PCR检测引物对及特异性探针，其特征在于：

新型鹅星状病毒的特异检测引物对及特异性探针为：

GoAst-qF：5’-ACGGACTGGACGCGTTATGA-3’；

GoAst-qR：5’-TGGCCACTTGGATTTCCCTT-3’；

GoAst-probe：5’-FAM-CCTCTCTTCTGGCGGATACG-MGB-3’；

鹅副黏病毒的特异检测引物对及特异性探针为：

GPMV-qF：5’-TGGTATCATATCGCAAAATT-3’；

GPMV-qR：5’-CATTGCACGAATGTCTATCT-3’；

GPMV-probe：5’-FAM-TGGAGAAGCTGTATCCCTGA-MGB-3’；

鹅细小病毒的特异检测引物对及特异性探针为：

GPV-qF：5’ -GCAAGACTGTAACGAATGAA-3’；

GPV-qR：5’ -CTCCAAGAACATCCAGATCT-3’；

GPV-probe：5’-FAM-AAACACTACTACAGCTCCTA-MGB-3’。

2.一种含有权利要求1中所述新型鹅星状病毒、鹅副黏病毒、鹅细小病毒多重荧光定量PCR检测引物对及特异性探针的用于同时检测新型鹅星状病毒、鹅副黏病毒、鹅细小病毒的检测试剂盒。

3.一种权利要求1所述的新型鹅星状病毒、鹅副黏病毒、鹅细小病毒多重荧光定量PCR检测引物对及特异性探针或权利要求2所述的检测试剂盒在检测水禽新型鹅星状病毒、鹅副黏病毒和鹅细小病毒的单一感染或混合感染中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于提取待检测样品组织中的病毒DNA和RNA，将所述RNA反转录为cDNA，利用权利要求1中所述新型鹅星状病毒、鹅副黏病毒、鹅细小病毒多重荧光定量PCR检测引物对及特异性探针对所述病毒DNA和cDNA进行扩增。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于进行扩展时使用的荧光定量PCR反应体系总体积为16 μL，其中：2×PCR MIX 8 μL；浓度为50 pM/μL的上游引物 0.2 μL；浓度为50 pM/μL的下游引物0.2 μL； 浓度为50 pM/μL的特异性探针0.1 μL；模版 1μL；加灭菌水至总体积为16 μL。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于扩增反应条件为：扩增程序为95℃2 min，94℃10 s，59℃10 s，72℃40 s，40个循环。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述提取方法具体为采集死亡水禽的内脏组织作为待检测临床样品，将内脏组织与生理盐水按照质量比1:3的比例进行研磨后离心，使用离心柱型病毒DNA/RNA提取试剂盒提取组织中的病毒DNA和RNA。

8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于反转录反应条件为：用HiScript cDNA第一链合成试剂盒对所述RNA进行反转录：采用40 μL体系，于EP管中依次加入RNA模板16 μL、随机引物2 μL、2×RTMIX 20 μL、HiScript Enzyme Mix 2 μL，总体积共40 μL，置于PCR仪中进行cDNA合成，以25℃5min、50℃ 45 min、85℃ 5 min、4℃ 5min的程序进行一个循环。