[发明专利]一种测定人血浆中阿帕替尼药物浓度的方法

说明书

本发明涉及抗肿瘤药物的临床血药浓度检测技术领域，尤其涉及一种测定人血浆中阿帕替尼药物浓度的方法。采用HPLC‑MS/MS法测定人血浆中阿帕替尼药物浓度，包括血液样本的前处理和高效液相色谱串联质谱(HPLC‑MS/MS)分析步骤。通过内标法对待测血液样本中阿帕替尼药物浓度进行定量。本发明将内标法与高效液相色谱串联质谱法相结合，提高了定量结果的准确性，消除系统误差，缩短了分析时间，使检测过程简便快速，利于在临床治疗中对患者体内的阿帕替尼血药浓度进行检测，为阿帕替尼的个性化给药、减少毒副反应的发生提供实验基础。

技术领域

本发明涉及抗肿瘤药物的临床血药浓度检测技术领域，尤其涉及一种测定人血浆中阿帕替尼药物浓度的方法。

背景技术

阿帕替尼是一种新型口服八项VEGFR2细胞内APT结合位点的小分子酪氨酸激酶抑制剂，对胃癌有较好的治疗效果和安全性，临床上主要用于晚期胃腺癌或胃-试管结合部腺癌三线或三线以上的治疗。由于体内代谢过程存在较大的个体差异，体内血药浓度与临床疗效和不良反应密切相关，检测其血药浓度从而调整用药剂量和次数，减少不良反应，在临床用药中具有重大意义。

目前对于阿帕替尼体内血药浓度的测定方法鲜有报道，没有有效的体内数据指标来指导临床用药，临床医生多采用观察手段来判断疗效。国内多数肿瘤药物的体内血药浓度的测定多采用液相色谱法和液相串联质谱法，前者分析时间长，消耗大量有机溶剂，最低定量下限较大等问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种测定人血浆中阿帕替尼药物浓度的方法，采用HPLC-MS/MS法，把内标法与高效液相色谱串联质谱法相结合，建立一种快速、灵敏的测定人血浆中阿帕替尼浓度的方法。

具体技术方案如下：

一种测定人血浆中阿帕替尼药物浓度的方法，采用高效液相色谱串联质谱进行检测，包含以下步骤：

(一)标准工作液的配制

精确称取阿帕替尼标准品1.02mg置于1.5mL离心管中，准确加入1.02mL纯甲醇溶液进行溶解，得到标准储备液A，即浓度为1mg/mL的阿帕替尼溶液，将标准储备液A用纯甲醇溶液进行稀释，稀释成0.04-40ug/mL浓度的阿帕替尼溶液，并在-80℃条件下保存；

(二)内标工作液的配制

准确称取贝那普利拉标准品1.0mg置于1.5mL离心管中，准确加入1.0mL纯甲醇溶液进行溶解，得到标准储备液B，将标准储备液B用纯甲醇进行稀释，得到浓度为5ug/mL的内标工作液，并在-80℃条件下保存；

(三)检测血液的离心

取待检测血液至少2mL，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血浆，上述血浆置于-20℃冷冻下保存至分析前备用；

(四)待测样本处理

(1)用移液枪移取10μL步骤(二)中所述内标工作液于1.5mL离心管中，加入50μL步骤(三)中所述血浆，在1500rpm的转速下涡旋震荡混合1min；

(2)用移液枪移取200μL含0.1-0.3％甲酸的甲醇溶液加入步骤(1)的离心管中，在1500rpm的转速下涡旋震荡混合2min，在14000rpm的转速下高速离心5min，得到上清液；

(3)用移液枪移取步骤(2)中的上清液20μL与1.5mL离心管中，加入380μL复溶液，在2000rpm的转速下涡旋震荡混合2min，得到的溶液即为待测样品；

(五)待测样品的测定

(4)标准曲线的制备