[发明专利]一种双特异性抗体及其应用有效
| 申请号： | 201811339728.1 | 申请日： | 2018-11-12 |
| 公开（公告）号： | CN109836502B | 公开（公告）日： | 2021-09-07 |
| 发明（设计）人： | 刘文慧;赵文彬;陈枢青 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C07K16/46 | 分类号： | C07K16/46;A61K39/395;A61P35/00 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 沈金龙 |
| 地址： | 310013 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 特异性 抗体 及其 应用 | ||
1.一种双特异性抗体，其特征在于，制备方法包括以下步骤：
(1)分别提供抗CD20和抗CD3的单克隆抗体的Fab结构域，且两者Fab结构域的C端带有LPXTG序列，分别命名为Fab-CD20和Fab-CD3，
(2)分别提供第一连接臂和第二连接臂，所述第一连接臂的两端分别具有寡甘氨酸接头和炔基接头，所述第二连接臂的两端分别具有寡甘氨酸接头和叠氮基接头，
(3)在Sortase A酶催化下，LPXTG序列与寡甘氨酸接头发生转肽反应，使Fab-CD20连接第一连接臂、Fab-CD3连接第二连接臂，或者Fab-CD20连接第二连接臂、Fab-CD3连接第一连接臂，
(4)所述叠氮基接头与炔基接头发生环加成反应，使第一连接臂与第二连接臂相连，从而将Fab-CD20和Fab-CD3相连，获得所述双特异性抗体，
两者Fab结构域仅在重链C端带有LPXTG序列，
所述Fab-CD20的重链氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，
所述Fab-CD3的重链氨基酸序列如SEQ ID No.5所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID No.6所示。
2.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述LPXTG序列为LPETG，Fab-CD20及Fab-CD3与LPXTG序列之间具有柔性接头，所述柔性接头由若干甘氨酸残基和/或丝氨酸残基组成。
3.如权利要求2所述的双特异性抗体，其特征在于，所述柔性接头为GGGGS、(GGGGS)2或(GGGGS)3。
4.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，步骤(1)提供的Fab-CD20和Fab-CD3的LPXTG序列末端还连接有用于蛋白纯化的组氨酸标签。
5.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一连接臂为GGG-(PEG)m-DBCO，第二连接臂为GGG-(PEG)n-N3，其中m≤4，n≤4。
6.如权利要求1～5所述的双特异性抗体在制备抗肿瘤药物中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，肿瘤类型为CD20阳性的B淋巴瘤。
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