[发明专利]一种双特异性抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种双特异性抗体，通过将两种抗体的Fab结构域分别偶联第一连接臂和第二连接臂后，再通过两个连接臂之间的叠氮基接头与炔基接头发生叠氮‑炔基环加成反应，从而两种抗体的Fab偶联获得双特异性抗体。本发明双特异性抗体的制备方法较传统的双特异性抗体的制备方法有着表达水平高，偶联效率高，组装正确率高的优点，该形式的双特异性抗体具有更高的亲和性和特异性，在体内外均能有效激活淋巴细胞并产生对CD20阳性的肿瘤细胞的特异性杀伤，而且由于缺乏抗体的Fc段，不仅更易于穿透实体瘤，而且能够避免Fc造成的非特异性杀伤的毒副作用具有更高的特异性。

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，特别是涉及一种双特异性抗体及其应用。

背景技术

癌症是21世纪人类健康面临的最大挑战之一。抗体药物在癌症的治疗中发挥着重要作用，随着临床数据的不断反馈，人们发现传统的单抗药物由于单一的表位容易造成耐药或者由于抗体药效不佳容易造成复发等限制了单抗药物在临床的应用上。双特异性抗体可以同时识别和结合两种不同的抗原表位，根据发挥作用的途径一般可分为两种，一种是通过协同作用同时阻断两种不同的信号通路而发挥作用，另一种是通过激活效应细胞(T细胞，NK细胞等)来发挥药效。首先针对多表位的双特异性抗体可以解决单抗单一表位造成的耐药；此外近些年来免疫治疗在肿瘤治疗中获得了巨大的成功，有研究者提出利用人体自身的免疫系统是是治疗肿瘤最为有效方式，效应细胞依赖的双特异性抗体可以利用人体自身的免疫细胞高效的杀伤肿瘤细胞。因此双特异性抗体以其独特的优势，在肿瘤的治疗中占据着举足轻重的地位。

目前研究最为广泛的为T细胞依赖的双特异性抗体，该抗体一条臂可以结合肿瘤相关抗原，同时另一条臂可以和效应T细胞表面的CD3分子结合，形成免疫突触从而激活T细胞，激活的T细胞可以释放穿孔素和颗粒酶通过裂解或者凋亡作用杀伤肿瘤细胞。

双特异性抗体早期主要的制备方法包括双杂交瘤细胞法和化学偶联方法。双杂交瘤细胞法产生的双特异性抗体一般为鼠源性抗体，具有较强的免疫原性，在临床上应用有限。化学偶联方法反应条件不佳且容易对抗体活性产生影响，因此应用范围不广。随着基因工程技术的发展，越来越多的研究者尝试用基因工程的方法制备双特异性抗体，例如目前应用最为广泛的基因泰克开发的knob into hole技术以及在其基础上罗氏开发的Crossmab技术，虽然这些方法显著的改善了早期方法的缺陷，但是两组抗体之间仍然存在着一定的错配概率以及抗体的表达水平较低的缺陷。

传统的双特异性抗体形式为IgG型，具有较大的分子结构，难以透过血管内皮质及细胞间隙从而到达实体瘤深部的肿瘤细胞，因此在实体瘤的治疗效果不如血液瘤。因此研究者尝试利用基因工程技术表达小型化的双特异性抗体，其中应用最为广泛的BiTE(双特异性T细胞衔接器)，安进公司的blinatumomab(CD19×CD3)是FDA第一个批准上市用于费城染色体阴性的复发性难治性前体B细胞急性淋巴细胞白血病(Gerhard Zugmaier,Molecular Immunology,Clinical overview of anti-CD19and ex vivo datafrom anti-CD33as examples for retargeting T cells in hematologicmalignancies,2015,(67)58-66)。BiTE主要由两条单链抗体(scFv)组成，分子量约50kDa，较传统的IgG型双特异性抗体有着易于穿透肿瘤组织的优点，但是由于较小的分子量和缺乏Fc段造成抗体的半衰期很短(约2h)，在临床使用时需要配置连续输液装置。因此临床上急需具有适宜药动学性质的小型化的双特异性抗体，目前研究比较多的抗体形式包括2F(ab’)，taFv-Fc，(scFv)₂-HSA等。