[发明专利]鹿胎盘活性蛋白及其提取方法和应用

说明书

本发明公开了一种鹿胎盘活性蛋白及其提取方法和应用，所述方法包括以下步骤：取鹿胎盘进行预处理；将预处理后的鹿胎盘冷冻后切碎，加入含蛋白酶抑制剂的生理盐水，制成匀浆；将匀浆完全冻结后再迅速溶化，重复1‑3次；将处理后的匀浆进行超声破碎细胞，然后离心分离收取上清液；将上清液冷却后加入丙酮，过滤收集沉淀，将沉淀干燥后得到粉末；将粉末溶于磷酸盐缓冲溶液中，加入饱和硫酸铵至饱和度为0.25，离心去除沉淀，然后取上清液调节pH值，加饱和硫酸铵至饱和度为0.50，得到盐析物；将盐析物溶于Tris‑Hcl缓冲液中，超滤得到超滤液；将超滤液脱盐后，干燥得到鹿胎盘活性蛋白。本发明的鹿胎盘活性蛋白能够促进干细胞增殖。

技术领域

本发明涉及保健食品技术领域，特别涉及一种鹿胎盘活性蛋白及其提取方法和应用。

背景技术

鹿胎为梅花鹿或马鹿的完整子宫、胎儿、胎盘和羊水的统称，包括出生后未食乳的仔鹿。主要来源有妊娠母鹿剖腹产而得；机械原因流产的胎儿；母鹿少乳、缺乳、拒哺、弃仔等原因而死亡的仔鹿。鹿胎盘是传统名贵的鹿类中药材，鹿胎盘及其制剂作为一种特殊的中药，具有良好的滋补作用，在我国的应用已长达几百年。

国内现有鹿胎盘产品主要是初级原材料或直接应用简单加工，大部分产品采用传统的产品加工工艺，没有同现代制药工艺进行有机结合，导致产品的生物利用度不高。产品层次低，精深加工产品少，技术含量较低，致使产品附加值低。鹿胎膏的传统工艺是高温熬制，这样会使一部分生物活性蛋白失活，影响效果。此外，采用食品工艺的方法从鹿胎盘中提取鹿胎盘粉，提取的是鹿胎盘中所有的结构蛋白质和功能蛋白质及多糖的混合物，具有免疫原性，药用价值低，生物活性差。这些方法都大大浪费了宝贵的鹿胎盘资源。

间充质干细胞，通常是指来源于发育早期中胚层的具有高度自我更新和多向分化潜能的多能干细胞，并能在特定条件下分化为软骨细胞、成骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞等。在成体干细胞中，间充质干细胞广泛存在于全身各种组织中，特别是骨髓、脂肪组织、脐血，甚至外周血也发现有间充质干细胞。由于间充质干细胞具有强大的增殖能力、较强的多向分化潜能陈、以及其低免疫原性比和免疫调节功能，成为组织工程中的理想种子细胞闭，因而在细胞替代治疗和组织工程方面显示出巨大价值而备受关注。

发明内容

为了解决现有技术的问题，本发明实施例提供了一种鹿胎盘活性蛋白及其提取方法和应用。所述技术方案如下：

一方面，一种鹿胎盘活性蛋白的提取方法，包括以下步骤：

(1)取鹿胎盘进行预处理；

(2)将步骤(1)预处理后的鹿胎盘于-30℃冷冻后切碎，加入含蛋白酶抑制剂的生理盐水，然后制成匀浆；

(3)将所述匀浆完全冻结后再迅速溶化，重复1-3次；

(4)将步骤(3)处理后的所述匀浆进行超声破碎细胞，然后离心分离，收取上清液；

(5)将所述上清液冷却后加入丙酮，过滤收集沉淀，将所述沉淀干燥后得到粉末；

(6)将所述粉末溶于pH7.0的磷酸盐缓冲溶液中，加入饱和硫酸铵至饱和度为0.25，离心去除沉淀，然后取上清液调节pH值至4.0，加饱和硫酸铵至饱和度为0.50，得到盐析物；

(7)将所述盐析物溶于Tris-Hcl缓冲液中，超滤得到超滤液；

(8)将所述超滤液用Sephadex G-25脱盐后干燥，得到鹿胎盘活性蛋白。

进一步的，所述步骤(1)取鹿胎盘进行预处理，具体方法为：

将鹿胎盘去除胎膜，大血管及脂肪和结缔组织。

进一步的，所述步骤(2)中，鹿胎盘与含蛋白酶抑制剂的生理盐水的质量体积比为＝1:6。

进一步的，所述步骤(2)中，蛋白酶抑制剂为苯甲基硫氟化物。