[发明专利]一种适用于新鲜烟草叶片全蛋白的提取方法

权利要求书

1.一种适用于新鲜烟草叶片全蛋白的提取方法，其特征在于，该方法针对苗期新鲜烟叶适用，具体包括如下步骤：

（1）制备提取液，具体采用裂解液RIPA 、NEB或不同pH的PBS；配方组成为：

裂解液RIPA ：pH 8.0的Tris-Cl、50 mM，EDTA、1mM，SDS、0.1%，NaCl、150 mM，NP-40、1%，PMSF、1 mM；

缓冲液NEB： pH 7.5的Hepes、20mM，KCl、40 mM，EDTA、1 mM，PMSF、1 mM；

（2）烟叶预处理

将烟草8-12叶期的新鲜烟叶，粉碎成粉备用；

（3）溶液法提取

在步骤（2）研磨成粉烟叶样品中加入步骤（1）中制备的提取液，震荡混匀后，冰上静置不少于1h；具体用量方面，研磨成粉烟叶样品100mg，提取液用量为500μl-1mL；

静置完成后，5000~15000rpm离心不少于20min，保留上清液，即为含有全蛋白的提取液。

2.如权利要求1所述适用于新鲜烟草叶片全蛋白的提取方法，其特征在于，步骤（2）中，所述烟草为K326或者NC82品种。

3.如权利要求2所述适用于新鲜烟草叶片全蛋白的提取方法，其特征在于，步骤（1）中PBS的pH=8.0、7.2或者6.0，具体组成为：

pH=8.0的PBS：NaCl、137 mM，KCl、2.7 mM，Na₂HPO₄ 9.5 mM，NaH₂PO₄、0.5 mM，PMSF、1 mM；

pH=7.2的PBS：NaCl、137 mM，KCl、2.7 mM，Na₂HPO₄ 7.2 mM，NaH₂PO₄、2.8 mM，PMSF、1 mM；

pH=6.0的PBS：NaCl、137 mM，KCl、2.7 mM，Na₂HPO₄ 1.2 mM，NaH₂PO₄、8.8 mM，PMSF、1 mM。

4.如权利要求3所述适用于新鲜烟草叶片全蛋白的提取方法，其特征在于，步骤（1）中，采用裂解液RIPA；步骤（3）中，提取液用量为1mL，13000 rpm离心20min。