[发明专利]一种选育Cry1C抗虫转基因水稻两系不育系的方法

权利要求书

1.一种选育Cry1C抗虫转基因水稻两系不育系的方法，其特征在于，该方法包含：

(1)以携带光温敏核不育基因的非转BT基因水稻材料为受体材料，以含有Cry1C基因和抗除草剂bar基因的可育水稻材料为供体材料，将两者杂交得到F₁代种子，种植F₁代种子，以F₁代为父本与亲本中的携带光温敏核不育基因的水稻材料回交，收获BC₁F₁回交世代杂交种子；

(2)将受体材料和BC₁F₁回交世代种植，通过对回交世代材料喷施草甘膦铵盐筛选携带Cry1C基因的植株，阳性单株为携带Cry1C基因的植株；

(3)取所述阳性单株的叶片，提取基因组DNA，使用光温敏核不育基因的SSR分子标记引物进行育性基因的PCR检测，选择引物标记为杂合信号，且株叶形态接近受体材料的单株，至抽穗时，对比受体材料的生长情况，选取BC₁F₁中最接近受体材料的单株，与受体材料单株继续回交，收获BC₂F₁种子；

(4)重复步骤(2)～(3)，至获得BC₃F₁回交世代杂交种子，种植BC₃F₁回交世代，苗期同步骤(2)的草甘膦铵盐筛选和PCR检测，选择育性基因纯合的单株自交，收获农艺性状接近轮回亲本的自交种子，得到BC₃F₂种子；

(5)将BC₃F₂种子浸种、催芽、播种，苗期同步骤(2)的草甘膦铵盐筛选获得阳性单株，置于适温28～32℃条件下，进行水肥管理，群体单株农艺性状接近受体材料的农艺性状，当群体植株开始进入育性敏感期时，采用冷水鉴定温度为22.5～23.5℃的冷水进行低温处理，待冷水低温处理结束，在适温生长；

(6)抽穗时开始观察筛选：保留没有明显花粉产生的单株，并取其穗支梗进行花粉育性检测，并割兜留桩，适温环境待再生穗抽穗；

(7)在再生幼穗将进入育性敏感期时，采用繁殖温度为19～21℃的冷水进行低温处理，待冷水低温处理结束，再转移到适温无风环境生长，防止花粉飘散，待抽穗自交结实，收获BC₃F₃种子；

(8)将BC₃F₃种子，重复步骤(5)～(7)，收获BC₃F₄种子，作为原种保存，BC₃F₄种子的光温敏核不育基因已经纯合，育性起点温度稳定；

(9)种植BC₃F₄种子，进行原种繁殖，育成新的抗虫两系不育系水稻，该抗虫两系不育系水稻还具有抗除草剂性能。

2.根据权利要求1所述的选育Cry1C抗虫转基因水稻两系不育系的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述草甘膦铵盐为0.1％的草甘膦水剂。

3.根据权利要求1所述的选育Cry1C抗虫转基因水稻两系不育系的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述SSR分子标记引物，上游引物为：5-ATGGCCTCGTCGAGTTCTAA-3，下游引物为：5-CGGTCAGCTGAATTTCTCTGT-3。

4.根据权利要求1所述的选育Cry1C抗虫转基因水稻两系不育系的方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述农艺性状包含：株高、生育期和分蘖数。

5.根据权利要求1所述的选育Cry1C抗虫转基因水稻两系不育系的方法，其特征在于，在步骤(5)中，所述BC₃F₂种子种植于128目穴盘中。

6.根据权利要求1所述的选育Cry1C抗虫转基因水稻两系不育系的方法，其特征在于，在步骤(5)中，所述育性敏感期指幼穗分化3～6期。