[发明专利]确定马铃薯StALDH基因甲基化位点变化在低温胁迫中作用的方法在审
| 申请号： | 201811347897.X | 申请日： | 2018-11-13 |
| 公开（公告）号： | CN109182593A | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 辛翠花;郭江波;池俊玲;赵慧;孙玮;贺引弟 | 申请（专利权）人： | 内蒙古科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/82 |
| 代理公司： | 北京酷爱智慧知识产权代理有限公司 11514 | 代理人： | 王莹 |
| 地址： | 014010 内蒙古*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 低温胁迫 马铃薯 基因甲基化 甲基化位点 位点 响应 表观遗传学 基因表达量 马铃薯品种 马铃薯生产 变化分析 功能分析 理论基础 领域研究 逆境胁迫 筛选分离 水平分析 相关基因 植物发育 植物响应 作用研究 基因DNA 抗冻 耐冷 耐受 修饰 高产 参考 培育 研究 | ||
1.一种确定马铃薯StALDH基因甲基化位点变化在低温胁迫中作用的方法，其特征在于：
所述方法包括低温胁迫下StALDH基因DNA甲基化位点变化分析、低温胁迫下StALDH基因表达量水平分析和NbALDH在植物发育及响应低温胁迫中功能分析的步骤。
2.根据权利要求1所述的确定马铃薯StALDH基因甲基化位点变化在低温胁迫中作用的方法，其特征在于：
所述低温胁迫下StALDH基因DNA甲基化位点变化分析依次包括马铃薯基因组DNA提取、基因组DNA纯化、基因组DNA的亚硫酸盐处理、基因扩增纯化、基因连接转化、阳性克隆子鉴定筛选和重组载体测序分析的步骤。
3.根据权利要求2所述的确定马铃薯StALDH基因甲基化位点变化在低温胁迫中作用的方法，其特征在于：
所述马铃薯的品种是大西洋。
4.根据权利要求2所述的确定马铃薯StALDH基因甲基化位点变化在低温胁迫中作用的方法，其特征在于：
所述基因连接转化采用的载体为pGM-T。
5.根据权利要求1所述的确定马铃薯StALDH基因甲基化位点变化在低温胁迫中作用的方法，其特征在于：
所述低温胁迫下StALDH基因表达量水平分析依次包括马铃薯幼苗总RNA的提取、cDNA的合成和Real-time PCR分析的步骤。
6.根据权利要求1所述的确定马铃薯StALDH基因甲基化位点变化在低温胁迫中作用的方法，其特征在于：
所述NbALDH在植物发育及响应低温胁迫中功能分析依次包括本生烟草NbALDH基因的PCR扩增、pYY13表达载体线性化、无缝拼接获得重组载体、工程农杆菌获取、注射烟草、VIGS植物表型观察、VIGS植物基因表达分析、VIGS植物光合效率测定和VIGS植物耐寒性评价的步骤。
7.根据权利要求6所述的确定马铃薯StALDH基因甲基化位点变化在低温胁迫中作用的方法，其特征在于：
所述无缝拼接获得重组载体具体包括：将pEASY-Uni Seamless Cloning andAssembly Kit连接到pTRV2衍生的载体pYY13上，然后转化大肠杆菌Top10感受态，复苏和涂板，获得重组载体NbALDH-TOP10。
8.根据权利要求6所述的确定马铃薯StALDH基因甲基化位点变化在低温胁迫中作用的方法，其特征在于：
所述工程农杆菌获取是将重组载体NbALDH-TOP10通过三亲融合的方法导入农杆菌GV3101中。
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