[发明专利]一种自组装树状纳米复合物及其应用

权利要求书

1.一种用于肿瘤相关膜蛋白检测及原位成像的触发链，其特征在于，包括识别区、触发区，所述识别区序列包括5’-GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG-3’，所述触发区序列包括5’-TGACGAACTAGTTGATGAAGCTG-3’。

2.根据权利要求1所述的触发链，其特征在于：所述触发链还包括隔离区，所述隔离区碱基数为至少一个，优选地，所述隔离区碱基数为3个，更优选地，所述隔离区序列为5’-TTT-3’。

3.一种用于肿瘤相关膜蛋白检测及原位成像的自组装树状纳米复合物，由F链、Q链、辅助链1、F’链、Q’链、辅助链2自组装获得，

所述F链的核苷酸序列包括：

5’-GTGTGCCTATTATGTCTCCTCCTGTGTGCCTATTATGTCTCCTCCTCAGCTTCATCAACTAGTTCGTCA-3’；

所述Q链的核苷酸序列包括：

5’-AACTAGTTGATGAAGCTGGACATAATAGGCACACGACATAATAGGCACAC-3’；

所述辅助链1的核苷酸序列包括：

5’-GTGTGCCTATTATGTCGTGTGCCTATTATGTCCAGCTT-3’；

所述F’链的核苷酸序列包括：

5’-AGGAGGAGACATAATAGGCACACTGACGAACTAGTTGATGAAGCTG-3’；

所述Q’链的核苷酸序列包括5’-CAGCTTCATCAACTAGGTGTGCCTATTATGTCTC-3’；

所述辅助链2的核苷酸序列包括5’-GCACACCTAGTTGATGAAGCTGTG-3’。

4.根据权利要求3所述的自组装树状纳米复合物，其特征在于：所述自组装树状纳米复合物还连接有权利要求1-2任意一项所述的触发链；

和/或，所述F链的5’端、F’链的3’端、辅助链1的5’端、辅助链2的3’端均连接有荧光基团，所述Q’链的5’端、Q链的3’端均连接有淬灭基团，优选地，所述荧光基团选自FAM、HEX中的任一种，所述淬灭基团选自BHQ1。

5.根据权利要求3-4任意一项所述自组装树状纳米复合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将F链、F’链、Q链、Q’链、辅助链1、辅助链2分别溶解至缓冲液中，制得含有相应核苷酸链的溶液；

2)将含有F链的溶液与含有Q链的溶液混合，变性退火处理，制得第一底物，将含有F’链的溶液与含有Q’链的溶液混合，变性退火处理，制得第二底物，将退火的第一底物与含有辅助链1的溶液混合，将退火的第二底物与含有辅助链2的溶液混合，反应结束后，将两种溶液混合，反应制得所述自组装树状纳米复合物。

6.根据权利要求5所述自组装树状纳米复合物的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中，按摩尔计，F链：Q链＝2:3，F’链：Q’链＝3:4，辅助链1：辅助链2＝1:2，F链：F’链：辅助链1＝12:27:20；

和/或，所述步骤2)中，将两种溶液混合后，加入所述触发链，制得连接有触发链的自组装树状纳米复合物，优选地，所述触发链在混合液中的浓度为5nM-150nM。

7.根据权利要求1-2任意一项所述的触发链或权利要求3-4任意一项所述的自组装树状纳米复合物在检测及原位成像循环肿瘤细胞膜蛋白中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：F链、F’链用于原位成像肿瘤细胞膜蛋白；和/或，辅助链1、辅助链2用于检测肿瘤细胞膜蛋白。

9.一种利用权利要求1-2任意一项所述的触发链或权利要求3-4任意一项所述的自组装树状纳米复合物检测及原位成像循环肿瘤细胞膜蛋白的方法，其特征在于，包括：取待测细胞悬液，加入连接有所述触发链的自组装树状纳米复合物，反应结束后，离心，去掉上清液，通过显微镜获得成像图。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，还包括：取待测细胞悬液，加入触发链，反应结束后，离心，去掉上清液，加入未连接触发链的自组装树状纳米复合物，反应结束后检测荧光，根据荧光强度值计算膜蛋白含量，优选地，肿瘤细胞膜蛋白标准曲线方程为Y＝748.38-275.96lgX，R²＝0.989，Y为荧光强度，X为肿瘤细胞浓度，单位cell*mL^-1，根据肿瘤细胞的膜蛋白平均含量，进一步计算出膜蛋白含量。