[发明专利]一种自组装树状纳米复合物及其应用

说明书

本发明提供一种自组装树状纳米复合物及其应用，其触发链包括识别区、触发区。本发明基于适配体识别及催化DNA探针自组装成树状纳米复合物，该复合物的组装合成方法简单、稳定性好，DNA链在催化链存在下能够自组装成树状纳米复合物，而不需要苛刻的反应条件和贵重的仪器；DNA树状纳米复合物检测肿瘤细胞表面膜蛋白含量的同时也能成像肿瘤细胞表面膜蛋白；通过利用适配体和催化链结合在一起能够特异性识别并主动靶向癌细胞膜蛋白和荧光成像；该DNA树状纳米复合物是由DNA链自组装而成，具有较低的生物毒性和免疫原性，利于其生物应用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种基于适配体识别及催化DNA探针自组装成的树状纳米复合物及其在检测和原位成像循环肿瘤细胞膜蛋白中的应用。

背景技术

肿瘤相关膜蛋白(TMP)是一种在癌细胞中异常表达的蛋白质。它们通常作为鉴定癌细胞在癌症发生和恶性肿瘤发展中的生理状态的标志。据估计，人类基因组的30％是编码膜蛋白，大约30-40％的市售药物靶向细胞表面膜蛋白。因此，分析TMP对肿瘤诊断，药物靶向转运和细胞类型分类至关重要。膜蛋白通常含有疏水区域，相互作用的异质结构和复杂的环境，使得它们分离和纯化非常麻烦，因此导致膜蛋白的分析程序复杂、繁琐且依赖于贵重仪器。除此之外，许多肿瘤细胞膜蛋白丰度极低。目前检测肿瘤细胞膜蛋白的主要策略是膜蛋白标记，分离和纯化，随后使用免疫荧光、蛋白质印迹(WB)或质谱(MS)为基础的技术进行蛋白质测定。WB尽管在半定量检测特定蛋白质方面取得了成功，但仍然存在一些缺点：灵敏度低，可能出现非特异性条带，并且需要复杂的操作。免疫荧光是最具代表性和最常用的成像方法之一，但目前还远未达到令人满意的程度。DNA纳米探针技术由于具有高灵敏度、非损伤性、能原位检测等优点而受到了极大的关注。现已报道的检测方法大部分都是基于抗体特异性识别肿瘤细胞表面膜蛋白，抗体一般都具有价格高，不易保存，效价不稳定等缺点，亟待设计新方法以克服上述缺陷。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种基于适配体识别及催化DNA探针自组装成树状纳米复合物用于检测和原位成像循环肿瘤细胞膜蛋白，用于解决现有技术中肿瘤相关膜蛋白的检测灵敏度低、特异性差、操作复杂、成本高等问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种用于肿瘤相关膜蛋白检测及原位成像的触发链，包括识别区、触发区，所述识别区序列包括5’-GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG-3’，所述触发区序列包括5’-TGACGAACTAGTTGATGAAGCTG-3’。

在本发明的一些实施例中，所述触发链还包括隔离区。

在本发明的一些实施例中，所述隔离区碱基数为至少一个。

在本发明的一些实施例中，所述隔离区碱基数为3个。

在本发明的一些实施例中，所述隔离区序列为5’-TTT-3’。

本发明第二方面提供一种用于肿瘤相关膜蛋白检测及原位成像的自组装树状纳米复合物，由F链、Q链、辅助链1、F’链、Q’链、辅助链2自组装获得，

所述F链的核苷酸序列包括：

5’-GTGTGCCTATTATGTCTCCTCCTGTGTGCCTATTATGTCTCCTCCTCAGCTTCATCAACTAGTTCGTCA-3’；

所述Q链的核苷酸序列包括：

5’-AACTAGTTGATGAAGCTGGACATAATAGGCACACGACATAATAGGCACAC-3’；

所述辅助链1的核苷酸序列包括：

5’-GTGTGCCTATTATGTCGTGTGCCTATTATGTCCAGCTT-3’；

所述F’链的核苷酸序列包括：