[发明专利]一种DNA编码分子库的筛选方法

说明书

本发明提供了一种DNA编码分子库的筛选方法，先采用设置有交联基团的第一DNA标记所述目标靶点蛋白，然后利用所述第一DNA和所述DNA编码分子库中的DNA分子的互补，实现化合物分子的筛选。本发明的DNA编码分子库的筛选方法，使活细胞上的靶点蛋白不需要被纯化分离及被专门过表达，能够进一步准确判断目标靶点的位置有效地排除非靶点蛋白和其他分子的影响，同时有利于后续分离其他非目标化合物，使目标化合物解码更准确。

技术领域

本发明涉及DNA编码分子库领域，尤其涉及一种新型DNA编码分子库的筛选方法。

背景技术

药物筛选是现代药物开发流程中检验和获取具有特定生理活性化合物的一个步骤，是指通过规范化的实验手段从大量化合物或中选择对某一特定作用靶点具有较高活性的化合物的过程。药物筛选的过程从本质上讲就是对化合物进行药理活性实验的过程，随着药物开发技术的发展，对新化合物的生理活性实验从早期的验证性实验，逐渐转变为筛选性实验，即所谓的药物筛选。

当代药物研发中，针对疾病的药物靶点，通过构建大型的候选药物分子库，进行高通量、大规模筛选是新药研发中不可或缺的手段。当今世界上主要的制药公司均拥有大型的分子库和大规模的筛选平台用于新药研发。然而，传统的分子库和筛选平台成本高昂、技术门槛高、管理运行复杂，成为高通量筛选发展和应用中的严重制约。近年来，DNA编码分子库技术逐渐发展起来，成为药物研发中的新兴筛选方法，使用DNA编码分子库进行药物筛选所使用的靶点大多为纯化后的蛋白质，而有些蛋白子纯化难度大则无法很好地使用DNA编码分子库进行筛选。为了解决这一问题，现有技术中通过引入一个带有光交联基团的短链DNA作为标签，目的是保护与蛋白质靶点结合的小分子的DNA标签；再利用DNA外切酶切除未与靶点结合的小分子DNA标签；最后利用PCR 扩增及DNA测序分析小分子的化学结构。此方法虽能够从一定程度将DNA编码分子库的筛选技术应用于未纯化未固载的蛋白靶点，但是在筛选过程中，目标靶点容易受到非靶点蛋白和其他分子影响，难以进行针对性的筛选，同时细胞表面与蛋白结合的分子和不结合的分子不容易分离，给分析目标化合物带来了影响。因此，DNA编码分子库的筛选方法仍然是制约其应用的重要因素。

发明内容

本发明的目的在于提供一种DNA编码分子库的筛选方法，旨在解决筛选过程中，目标靶点容易受到非靶点蛋白和其他分子影响以及细胞表面与蛋白结合的分子和不结合的分子不容易分离的问题。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种DNA编码分子库的筛选方法，包括以下步骤：

(1)提供第一DNA标记的目标靶点蛋白；其中，所述第一DNA连接有交联基团，且所述第一DNA通过所述交联基团与目标靶点蛋白交联结合；

(2)筛选目标化合物；将所述第一DNA标记的目标靶点蛋白与DNA编码分子库孵育，得到目标靶点蛋白-编码分子库混合体系，其中，所述DNA编码分子库中至少含有一种能与所述目标靶点蛋白结合的目标编码化合物，且所述DNA编码分子库中的碱基与所述第一DNA靠近目标靶点蛋白一端的至少5 个碱基之间形成互补；

(3)分离并解码目标化合物；对所述目标靶点蛋白-编码分子库混合体系进行分离、筛选，将分离得到的目标靶点蛋白-编码分子库偶联体系进行变性解离，分析所述编码分子库中DNA分子类型，根据所述分析结果，确定与目标靶点蛋白结合的化合物类型。

本发明提供的一种DNA编码分子库的筛选方法，先采用设置有交联基团的第一DNA标记所述目标靶点蛋白，然后利用所述第一DNA和所述DNA编码分子库中的DNA分子的互补，实现化合物分子的筛选。该方法具有以下优点：