[发明专利]一种烟叶醇化过程中微生物群落演替的分析方法

权利要求书

1.一种烟叶醇化过程中微生物群落演替的分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)取样：自然醇化的烟叶样品，从醇化开始，间隔相同时间进行取样；

2)构建基因文库：提取每个时间段采集的样品的基因组DNA，分别构建16S rRNA基因文库和内转录间区基因文库；

3)分别对步骤2)中构建的基因文库数据进行分析，得出烟叶醇化过程中微生物群落演替规律。

2.根据权利要求1所述的烟叶醇化过程中微生物群落演替的分析方法，其特征在于，步骤1)所述自然醇化的烟叶包括自然醇化的烤烟烟叶以及自然醇化的雪茄烟叶。

3.根据权利要求1所述的烟叶醇化过程中微生物群落演替的分析方法，其特征在于，步骤1)所述取样，是指自然醇化2-3年的烟叶从醇化开始每隔2～3个月取一次样。

4.根据权利要求1所述的烟叶醇化过程中微生物群落演替的分析方法，其特征在于，步骤2)所述16S rRNA基因文库构建所用的上游引物为799F，其序列如SEQ ID No.1所示；所用的下游引物为1193R，其序列如SEQ ID No：2所示。

5.根据权利要求1所述的烟叶醇化过程中微生物群落演替的分析方法，其特征在于，步骤2)所述内转录间区基因文库构建所用的上游引物为ITS1-1F-F，其序列如SEQ ID No.3所示，下游引物为ITS1-1F-R，其序列如SEQ ID No：4所示。

6.根据权利要求1所述的烟叶醇化过程中微生物群落演替的分析方法，其特征在于，步骤3)所述分析包括自然醇化的烟叶中细菌和真菌的群落组成分析以及基因功能分析。

7.根据权利要求6所述的烟叶醇化过程中微生物群落演替的分析方法，其特征在于，步骤3)所述分析是指先利用QIIME软件对基因文库中序列进行提取后，利用UCLUST将序列分类，再利用Usearch版本8.0鉴定和去除嵌合序列，16S rRNA基因使用UCLUSTSliva数据库进行比对，进行物种注释，内转录间区基因使用UNITE数据库进行比对，进行物种注释，最后细菌利用PICRUSt预测基因的功能，真菌使用FunGuild预测基因的功能。

8.权利要求1-7任意一项所述的分析方法得出的演替规律在人工醇化烟草中的应用。

9.权利要求1-7任意一项所述的分析方法得出的演替规律在建立微生物促烟叶醇化菌库中的应用。