[发明专利]1α,25-二羟基维生素D高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒

说明书

本发明提供一种1α,25‑二羟基维生素D2和1α,25‑二羟基维生素D3高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒，由对照品、质控品、同位素内标提取液、稀释液、转化液、复溶液、流动相添加剂A、流动相添加剂B、96孔反应板、96孔过滤板、说明书组成。本试剂盒可以分别检测1α,25‑二羟基维生素D2和1α,25‑二羟基维生素D3，用时较短，提高了检测的效率。

技术领域

本发明属于检测领域，具体涉及1α,25-二羟基维生素D高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒以及检测方法。

背景技术

维生素D为固醇类衍生物，麦角甾醇、麦角骨化醇，具有抗佝偻病作用，又称抗佝偻病维生素。维生素D家族成员包括维生素D1、D2、D3、D4和D5，对健康关系较密切的是D2(麦角钙化醇)和D3(胆固化醇)。它不仅仅只是一种脂溶性维生素，本质上是具多种生理活性的一种激素，具有广泛的生理代谢活性。维生素D缺乏会引起佝偻病、手足抽搐、软骨病等疾病，但是长期摄入过多的维生素D，将引起血管和器官钙化。因此定期检测人体内维生素D的水平，对于衡量人体维生素D补充效果，及维持人体健康具有重要的意义。

维生素D可以通过皮肤合成或者食物摄取来产生。维生素D半衰期约3小时，并与维生素D结合蛋白在一起；1α,25-(OH)₂维生素D2/D3半衰期约24小时,在血中含量极低；25-羟基维生素D是血中被检测的标志物，因为它半衰期约为3周,较为稳定,又是人体内维生素D的主要储存形式，通过检测它可以确定总体维生素D的情况。维生素D是维持骨骼健康的主要元素。儿童期维生素D的严重缺乏将导致骨骼畸形，即佝偻病。维生素D缺乏是继发性甲状旁腺机能亢进症的常见病因。近年来发现维生素D与癌症、心血管疾病、糖尿病等都有相关性，足量的体内维生素D水平对癌症、多发性硬化症、糖尿病等有一定预防作用。

维生素D缺乏的人群可以通过食物、阳光及维生素补充剂提高体内维生素D含量，食物来源包括蛋黄，三文鱼，金枪鱼，鱼肝油，牛肝，人造奶油，酸奶，奶酪等；补充剂提供的维生素D包含两种形式：D2和D3。两种形式都有效，每一种都可以保证充足的维生素D水平。但是2和3是不等同的。D3是人体产生的形式，最近有研究表明D3在快速提高维生素D水平上可高达3倍，而且能维持更加长久。补充剂量取决于年龄和危险因素。推荐的膳食标准是70岁老人为600IU/天，71及以上为800IU/天。一些研究人员提出，维生素D含量高可带来多种健康益处，但是太多会造成伤害。根据美国医学研究所，超过4000IU/天，危害的风险会增加。

lα，25(OH)₂D常被应用于慢性肾功能损伤、甲状旁腺功能减退以及高钙血症等疾病的治疗，准确定量血清lα，25(OH)₂D水平对疾病的诊断及预后监测具有重要作用，然而传统的免疫学检测方法不能区别检测lα，25(OH)₂D2和lα，25(OH)₂D3，同时受到同分异构体及维生素D结合蛋白等的影响而缺乏足够的检测准确度、特异性。

综上所述，本领域迫切需要开发一种分析时间短、灵敏、准确且能够同时定量检测1α,25-二羟基维生素D2和1α,25-二羟基维生素D3的的检测试剂盒及检测方法。

发明内容

本发明的目的就是一种分析时间短、灵敏、准确且能够同时定量检测1α,25-二羟基维生素D2和1α,25-二羟基维生素D3的的检测试剂盒及检测方法。

在本发明的第一方面，提供了一种高效液相色谱质谱联用法检测试剂盒，包括：

(1)质控品，所述质控品含1α,25-二羟基维生素D2和1α,25-二羟基维生素D3；

(2)同位素内标提取液，所述同位素内标提取液含有1α,25-二羟基维生素D2-d6和1α,25-二羟基维生素D3-d6；

(3)稀释液，所述稀释液为饱和一元醇；