[发明专利]一种快速高效的秀珍菇菌种繁育方法

权利要求书

1.一种快速高效的秀珍菇菌种繁育方法，其特征在于，该方法采用以下步骤：

（1）秀珍菇母种的提取：筛选具有本菌株特性、健壮无病、形态正常的秀珍菇成熟子实体，置于超净工作台中操作，先用75%乙醇对子实体外表进行擦拭消毒，然后用无菌刀片切取菌柄与菌盖交界处的组织块接到改良PDA培养基斜面上，置于温度23~27℃、相对湿度75~85%的黑暗条件下培养，1~2d后菌丝开始萌发，筛选出菌丝生长速度快和长势强的斜面作为母种；

（2）母种超声波脉冲处理：采用超声波智能生化反应仪对筛选出的母种进行超声波脉冲处理，超声频率为35KHz，功率为30W，超声时间15s，超声间隔5s，超声全程40min；

（3）母种的扩繁：将上述母种接种到装有改良PDA培养基的平皿中，置于与步骤（1）相同的条件下培养，期间每隔2d检查1次，及时去除污染，直到菌丝长满平皿；

（4）母种液体培养：将扩繁后的秀珍菇母种菌块按照每块5mm，5~6块/瓶的接种量接种于装有100mL液体培养基的250mL摇瓶中，避光静置24h后置于恒温摇床上培养5~7d获得菌液；再将菌液按照4~6%（v/v）的接种量接种于装有相同液体培养基的种子罐中，温度22~26℃，搅拌通气培养6~8d获得种子液；

（5）种子液发酵罐培养：将发酵培养基装入发酵罐中，装液量为发酵罐容量的70%~80%，通入空气搅拌均匀后，密封罐口进行高压蒸汽灭菌；灭菌结束后，待发酵罐内压力降至0，培养基温度降至30℃以下时，在无菌条件下按照4~6%（v/v）的接种量从接种口注入步骤（4）获得的秀珍菇种子液，关闭接种口后开始发酵罐培养，培养期间发酵罐温度控制在23~25℃，转速控制在140~160r/min，罐压控制在0.01~0.03MPa，通气量控制在4.0~5.0L/min，一共培养5~7d，获得符合标准的发酵菌种。

2.根据权利要求1所述的一种快速高效的秀珍菇菌种繁育方法，其特征在于，所述步骤（1）与（3）中，改良PDA培养基的成分为：马铃薯140~180g/L、红薯55~75g/L，红糖15~25g/L、黄原胶16~20g/L、水解蛋白3~4g/L、酵母膏1~2g/L、麦芽汁18~25ml/L、磷酸二氢钾1.5~2.0g/L，硫酸镁0.4~0.6g/L，硫酸铜0.03~0.05g/L，余量为蒸馏水，pH调节为5.8~6.2。

3.根据权利要求1所述的一种快速高效的秀珍菇菌种繁育方法，其特征在于，所述步骤（4）中，液体培养基的成分为：红薯淀粉10~14g/L，玉米汁12~18ml/L，磷酸二氢钾1.8~2.2g/L，硫酸镁0.9~1.1g/L，花生壳粉3.5~4.5g/L，酵母浸粉2.3~2.7g/L，豆饼粉2.5~3.1g/L，米糠0.7~1.5g/L，贝壳粉1.7~2.5g/L，赤霉素12~16mg/L，芸薹素内酯 1.5~1.9mg/L，余量为蒸馏水，pH调节为5.8~6.2。

4.根据权利要求1所述的一种快速高效的秀珍菇菌种繁育方法，其特征在于，所述步骤（4）中，恒温摇床的温度控制在23~27℃，转速控制在120~140r/min，种子罐培养的搅拌速度控制在80~120r/min，通气量控制在0.8~1.2L/min。

5.根据权利要求1所述的一种快速高效的秀珍菇菌种繁育方法，其特征在于，所述步骤（5）中发酵培养基的成分为：红薯粉20~26g/L，小麦秸秆粉18~24g/L，红糖5~10g/L，废糖蜜4~8g/L，菌糠碳化物2.2~3.0g/L，酒醅糟1.0~1.8g/L，磷酸二氢钾0.8~1.5g/L，鱼废料粉2.6~3.0g/L，海草粉3.9~4.5g/L，茶叶渣1.5~2.7g/L，蜣螂粉3.3~3.9g/L，硫酸镁0.5~1.0g/L，盐酸吡哆醇 60~90mg/L，硬脂酸1.2~1.8mg/L，吐温-40 0.9~1.3mg/L，余量为蒸馏水，发酵培养基初始pH调节为6.0~6.5。

6.根据权利要求1所述的一种快速高效的秀珍菇菌种繁育方法，其特征在于，所述步骤（5）中高压蒸汽灭菌的参数为：蒸汽压力0.13~0.15Mpa，灭菌温度121℃，灭菌时间60min。

7.根据权利要求1所述的一种快速高效的秀珍菇菌种繁育方法，其特征在于，所述步骤（5）中符合标准的发酵菌种是指培养基澄清透明不浑浊、稍黏稠，无杂菌、无异味；菌丝球（或菌丝片段）均匀悬浮于液体中不分层，直径为1.0~2.0mm。