[发明专利]一种同时检测45个Y基因座的复合扩增检测试剂盒

权利要求书

1.一种同时检测45个Y基因座的复合扩增检测试剂盒，其特征在于：采用聚合酶链式反应，复合扩增45个Y基因座，其扩增产物用基因测序仪进行检测；

45个Y基因座包含33个低突变率基因座、9个快速突变型位点和3个极低突变频率的YIndel基因座，其中，33个低突变率基因座为：DYS481，DYS389I，DYS389II，DYS635，DYS533，DYS527a，DYS527b，DYS460，DYS458，DYS19，DYS444，DYS385a，DYS385b，DYS593，DYS393，DYS549，DYS439，DYS392，DYS448，DYS522，DYS456，DYS390，DYS438，Y_GATA_H4，DYS645，DYS459a，DYS459b，DYS437，DYS447，DYS391，DYS643，DYS557和DYS596；9个快速突变型位点为：DYS570，DYS576，DYS627，DYF387S1a，DYF387S1b，DYF404S1a，DYF404S1b，DYS449和DYS518；3个极低突变频率的Y Indel基因座为：rs771783753，rs759551978和rs199815934；

DYS389I和DYS389II扩增引物相同，DYF387S1a和DYF387S1b扩增引物相同，DYS385a和DYS385b扩增引物相同，DYS459a和DYS459b扩增引物相同，DYF404S1a和DYF404S1b扩增引物相同，DYS527a和DYS527b扩增引物相同；

45个基因座对应的引物编号和引物序列如下表所示：

45个Y基因座分为下列五组，第一组：rs771783753，DYS481，DYS389I，DYS389II，DYS635，DYS533，DYS627，DYS527a，DYS527b和DYS576；第二组：DYS460，DYS458，DYS19，DYF387S1a，DYF387S1b，DYS456，DYS385a，DYS385b，DYS593和rs759551978；第三组：rs199815934，DYS393，DYS549，DYS439，DYS392，DYS448，DYS518和DYS522；第四组：DYS456，DYS570，DYS390，DYS438，Y_GATA_H4，YS449，DYF404S1a和DYF404S1b；第五组DYS645，DYS459a，DYS459b，DYS437，DYS447，DYS391，DYS643，DYS557和DYS596；第一组的引物5′端第一个碱基用FAM标记；第二组的引物5′端第一个碱基用HEX标记；第三组的引物5′端第一个碱基用TAMRA标记、引物5′端第六个碱基用FAM标记；第四组的引物5′端第一个碱基用ROX标记、引物5′端第六个碱基用FAM标记；第五组的引物5′端第一个碱基用atto590标记、引物5′端第六个碱基用FAM标记。

2.根据权利要求1所述的同时检测45个Y基因座的复合扩增检测试剂盒，其特征在于：45个基因座对应的引物编号、引物序列、荧光标记、及扩增体系中各条引物浓度如下表所示：

表中，中间斜体加下划线碱基以FAM修饰。

3.根据权利要求1或2所述的同时检测45个Y基因座的复合扩增检测试剂盒，其特征在于：适用的样本DNA，为利用Chelex100法、磁珠提取法或有机抽提法中任意一种提取的男性基因组DNA，或者为免提取的滤纸、FTA卡、棉签或纱布中任意一种载体收集的男性血液或口腔细胞。

4.根据权利要求1或2所述的同时检测45个Y基因座的复合扩增检测试剂盒，其特征在于：聚合酶链式反应在2×PCR Master MIX缓冲液中进行，2×PCR Master MIX缓冲液组分为：MgCl₂：4mM，Tris-HCl：100mM，KCl：50mM，(NH₄)₂SO₄：16mM，dNTPs：0.4mM，BSA：1.2g/L，NP40：1.6wt％，Tween 20：1wt％和热启动taq酶：0.4U/ul，其中，Tris-HCl的pH为8.3、温度为25℃，dNTPs为四种脱氧核糖核苷酸的等摩尔混合物。

5.根据权利要求1或2所述的同时检测45个Y基因座的复合扩增检测试剂盒，其特征在于：扩增程序为：95℃，3分钟；94℃，5秒钟；60℃，1分钟；26-28个循环；60℃终延伸10分钟；4-16℃保持。