[发明专利]一种同时检测45个Y基因座的复合扩增检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种同时检测45个Y基因座的复合扩增检测试剂盒，采用聚合酶链式反应，复合扩增45个Y基因座，其扩增产物用基因测序仪进行检测。45个Y基因座包含33个低突变率基因座、9个快速突变型位点和3个极低突变频率的Y Indel基因座。本发明可同时复合扩增45个基因座，对累积的3495个无关男性进行检测，共检测出3491个单倍型，GD值达0.99886；采用新型荧光标记技术，荧光效率高，确保了更快的扩增速度、更好的均衡性和更高的灵敏度；具有很强的检材适应性、较强的扩增特异性、较高的温度耐受性和良好的种属特异性，对高浓度女性样本有很好的耐受性。

技术领域

本发明涉及一种同时检测45个Y基因座的复合扩增检测试剂盒，属于生物学领域。

背景技术

短串联重复序列(简称STR)也称微卫星DNA，是一类广泛存在于原核及真核生物基因组中的核苷酸重复序列。其一般由2-6个核苷酸为重复单元组成的几十至一百多个的核苷酸重复序列，不同数目的核心序列呈串联重复排列，而长度呈现多态性。根据两端保守性序列，设计引物，进行PCR，然后通过聚丙烯酰胺、琼脂糖凝胶电泳或毛细管电泳等检测STR遗传标记的多态性。

人类Y染色体的遗传多态性具有多个研究优势，如在遗传过程中不与另外的染色体发生重组，而突变是多样性改变的唯一因素，使得按年代先后发生的各种稳定的单倍型得以保存和进化，从而能够构建出很清楚的Y染色体基因进化谱系树；Y染色体的序列结构特征能稳定地由父亲传给儿子并为男性所特有，具有父系遗传特点；非重组区域具有较低的群体内多态性和较高的群体间变异，易产生人群特异性的单倍型，从而使得其分布方式具有极高的地理特异性；Y染色体非重组区域发生回复、平行突变的概率非常低，增加了Y染色体基因谱系树的可靠性；非重组区域突变率相对稳定，能够很好的区分群体间亲缘关系，STR的突变率高，能够很好区分近代人群个体之间的亲缘关系。

早期的Y-STR复合扩增体系中仅包含有12个左右的Y-STR基因座，而随着DNA作为鉴定手段的应用愈加广泛、数据比对的增加和Y-STR父系遗传的特性不断研究，这就需要更多的基因座来提供更多的信息量以满足各方面的需求，比如在亲子鉴定、失踪人口比对时，为了避免误判的发生，往往需要辅助多种试剂盒进行联合使用，以达到检测的准确度要求。另外，随着我国DNA数据库建设规模将不断扩大，数据比对的作用也愈发的重要，这就需要STR试剂盒在基因座位上具有较高的兼容性。近年来，全国公安机关DNA数据库的库容量突飞猛进，利用DNA数据库直接破获的案件越来越多。常规DNA数据库是“一对一、点对点”的比对模式，需要相应的参照比对样本才能进行认定或者排除，而Y-STR数据库则是“以点带面”的比对模式，比中嫌疑人所属的家系即可极大缩小侦查范围。用于比对的Y-STR基因座数量影响比对的效率。公安机关对于用于建库的Y-STR基因座有推荐数量，包括20个必选(DYS19，DYS385a，DYS385b，DYS389I，DYS389II，DYS390，DYS391，DYS392，DYS393，DYS437，DYS438，DYS439，DYS456，DYS458，DYS448，DYS635，Y_GATA_，H4，DYS481，DYS533和DYS576)，15个优选基因座(DYS460，DYS549，DYF387S1a，DYF387S1b，DYS449，DYS518，DYS627，DYS570，DYS527a，DYS527b，DYS447，DYS444，DYS557，DYS643和DYS596)及25个备选基因座(DYS446，DYS510，DYS622，DYS443，DYS587，DYS522，Y_GATA_A10，DYS520，DYS552，DYS593，DYS531，DYS459a，DYS459b，DYS508，DYS388，DYS617，DYS645，DYS713，DYS630，DYF404S1a，DYF404S1b，DYS626，DYS526a，DYS526b和Y indel)。

发明内容

本发明提供一种同时检测45个Y基因座的复合扩增检测试剂盒，应用于人类Y染色体45个Y基因座的复合扩增，具有扩增快速、均衡性好和灵敏度高的特点，能满足中国人群个体识别、性犯罪等男女混合斑中男性罪犯个体识别、亲子鉴定和Y染色体DNA建库需求等。