[发明专利]一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒及其制备和应用

说明书

本发明涉及一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒及其制备和应用。该纳米颗粒为：FA‑CS‑g‑OA负载DOX。制备方法包括：接枝叶酸的壳聚糖制备，接枝齐墩果酸的叶酸壳聚糖纳米颗粒制备，齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒制备。该方法操作简单、实验条件温和，载药量更大，且该壳聚糖载药纳米颗粒能够长效缓释药物。

技术领域

本发明属于载药纳米材料及其制备方法和应用领域，特别涉及一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒及其制备方法和应用。

背景技术

癌症仍然是世界上最主要的致命性疾病，而且未来癌症患者的预估数量是非常庞大的。根据2012年的调查，有超过1400万新的癌症病例出现，其中820万癌症患者最终死亡。虽然在过去的几十年里，癌症治疗取得了巨大的进展，但不幸的是，这种疾病治愈的病人数量仍然有限。尤其是乳腺癌，这种女性中最常见的癌症。据报道，只有23％的乳腺癌患者存活超过5年。化疗是治疗乳腺癌的主要手段。这种方法依靠化疗药物(如阿霉素、紫杉醇、吉西他滨、5-FU等)的高细胞毒性，广泛的杀死肿瘤细胞。然而，大多数常用的化疗药物都存在固有的缺陷，如对正常组织的毒副作用、水溶性差、生物利用度低、免疫原性差、血液清除快、耐药癌细胞的出现等。为了解决上述局限，研究人员越来越关注可以提高抗肿瘤药物的溶解度和靶向性的治疗药物，以及保护药物免受血液/肾清除和通过EPR效应快速实现药物在肿瘤位置的积累。

另一方面，肿瘤细胞的多耐药性是癌症患者化疗失败的主要原因。其机制主要与膜转运蛋白P-糖蛋白(P-gp)和多耐药蛋白(MRP1)的过表达有关，这些蛋白会泵出细胞内的抗癌药物，从而维持细胞中的低药物水平，这大大降低了细胞对药物的敏感性。研究结果表明，齐墩果酸(OA)可以增强许多抗癌药物的细胞毒性作用，这是由于其抑制了MRP1和P-gp活性，从而逆转了MRP1介导的抗癌药物外排，这称为“化学增敏效应”。除此之外，疏水性OA的引入可以为壳聚糖复合材料提供一个疏水核心，其在水中分散为两亲性纳米颗粒可通过自组装形成具有核壳结构的球体，并可装载疏水药物阿霉素(DOX)，在体内可发挥协同治疗乳腺癌的作用。因此，在这些抗肿瘤化疗药物的临床应用中，选择合适的药物载体是至关重要的。纳米药物传递系统的大小和细胞多耐药性的克服仍然是一项具有挑战性的任务。如何创新性地将抗肿瘤药物DOX和化疗增敏剂OA结合在一起，在肿瘤位置达到同步释放特性，值得深入研究。根据之前报道，Muhammad Sarfraz等，利用脂质体载体构建将齐墩果酸和DOX共载药的纳米药物传递系统(Muhammad Sarfraz，等.Oncotarget 8(2017)47136-47153)，进行抗肿瘤治疗，得到了较好的治疗效果和较小的副作用。但该方法操作步骤较为复杂，载药量不够，主动靶向性偏低，其载体粒径也偏大。因此对这种共载药系统的深入探究，具有广阔的研究前景。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒及其制备方法和应用，以克服现有技术中肿瘤细胞多耐药性的缺陷。

本发明的一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒，所述纳米颗粒为：FA-CS-g-OA负载DOX，其中FA-CS-g-OA的结构式为：

式中n＝50～100。

本发明的一种齐墩果酸接枝的壳聚糖载药纳米颗粒的制备方法，包括：

(1)将叶酸FA经EDC和NHS活化，将活化后的FA加到溶有壳聚糖的醋酸缓冲液中，避光搅拌，透析，除去未反应的FA，冻干，得到接枝叶酸的壳聚糖FA-CS，其中FA、EDC和NHS的摩尔比(确认)为1:1～1.5:1～1.5，叶酸FA与壳聚糖的摩尔比为500:1～100:1；

(2)在DMAP的存在下，将步骤(1)中FA-CS溶解在吡啶中，加入齐墩果酸OA，搅拌反应，纯化，得到接枝齐墩果酸的叶酸壳聚糖纳米颗粒FA-CS-g-OA，冻干，其中FA-CS、DMAP、吡啶和OA的摩尔比为1:0.00001～1:0.01～1:400～0.0001；