[发明专利]一种产磁小体铁氧化菌的培养方法

权利要求书

1.一种产磁小体铁氧化菌的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：将产磁小体铁氧化菌接种到培养基中，发酵培养，培养温度为20-25℃。

2.根据权利要求1所述一种产磁小体铁氧化菌的培养方法，其特征在于，所述产磁小体铁氧化菌为可以合成磁小体的嗜酸性铁氧化菌。

3.根据权利要求1所述一种产磁小体铁氧化菌的培养方法，其特征在于，发酵培养过程中，通氧量为1.8-5.6L/min。

4.根据权利要求1所述一种产磁小体铁氧化菌的培养方法，其特征在于，发酵培养的时间为25-32h。

5.根据权利要求1所述一种产磁小体铁氧化菌的培养方法，其特征在于，将产磁小体铁氧化菌的菌液以体积比10％的接菌量接入培养基中。

6.根据权利要求1-5任一项所述一种产磁小体铁氧化菌的培养方法，其特征在于，按照以下比例配置培养基：硫酸铵0.24-2.4g/L，氯化钾0.1-1.0g/L，磷酸氢二钾0.5-5.0g/L，硫酸镁0.5-5.0g/L，硝酸钙0.01-0.1g/L，葡萄糖酸1.98g/L，pH值为2.0。

7.一种从产磁小体铁氧化菌提取磁小体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)采用离心的方式，收集权利要求1-6任一项所述培养方法培养的菌体；

(2)提取磁小体：将步骤(1)收集的菌体悬浮，水浴后冰浴条件超声；将超声后的溶液置于磁铁S极静置；倾倒上清；获得磁小体。

8.根据权利要求7所述提取磁小体的方法，其特征在于，步骤(1)的具体操作为：将生长到对数期的菌液抽滤，取滤液进行二次过滤，弃滤液；取pH为2.0的硫酸将滤纸上的菌体冲下；将菌体悬浮液离心，离心条件为2000rpm，5min，取上清置于新的容器中，以8000rpm离心5min，弃上清；若沉淀较红，则用上述离心条件离心3次，直至沉淀不红或淡红；若沉淀不红或淡红，则用8000rpm，5min的条件反复离心4次；最后用0k将菌体悬浮，放入液氮罐中2-3min后冻藏于-20℃冰箱中。

9.根据权利要求8所述提取磁小体的方法，其特征在于，0k包括：硫酸铵24g/L，氯化钾1.0g/L，磷酸氢二钾5.0g/L，硫酸镁5.0g/L，硝酸钙0.1g/L，溶剂为水，pH值为2.0。

10.根据权利要求7-9任一项所述提取磁小体的方法，其特征在于，步骤(2)的操作步骤如下：将步骤(1)收集后的菌体悬浮于pH 7.4的10mM Tris-HCl缓冲溶液中；于37℃水浴1h后冰浴条件超声1h；将超声后的溶液转于平底试管中，将试管底部于磁铁S极静置1h；倾倒上清；然后用1M HEPES反复吹洗聚集在试管底部的磁小体颗粒；最后用pH 7.4的10mMHEPES清洗磁小体8-10次，用生理盐水4℃保存。