[发明专利]一种CART细胞冻存液检定方法

说明书

本发明提供了一种表达CART细胞冻存液的检定方法，该方法包括：理化性质、安全性检测。经过一系列严格检测的CART冻存液具有均一性、稳定性、安全性的特点。

技术领域

本发明涉及医药生物领域，具体涉及一种表达CART细胞冻存液检定方法。

背景技术

由于生物技术产品的复杂性及易变性，技术部门仅通过对终产品的质量检定难以实现对产品的全面质量控制，所以要保证产品的安全有效和质量可控，研制单位必须从原材料(包括菌、毒种或细胞库)、生产工艺、原液、半成品、成品到贮存条件等进行全程的质量控制。而如何建立一套完善的质量控制体系，对于生物制药来说是一项复杂的系统工程，需要我们在实践中不断地探索。

生物制品需进行全过程的质量控制，质量标准的建立和完善是这一过程中最重要的环节。与化学药物相比，生物制品的检定项目繁多且检定方法复杂，按照我国现行的技术标准，对于重组产品来讲，常规的检定项目就有20多项。近年来，随着国家生物制品规程的补充修订及GMP的实施，国内生物技术药物的质量标准更加规范，执行也更加到位。

CART细胞作为一种活的制剂，具有更多的不确定性，作为个体化细胞制剂，每个CART细胞在生产过程中T细胞的比率不一样，T细胞的活化程度不一样，表达CAR的病毒的感染效率不同，CART细胞在体外培养的增殖速率不同，每个病人CART细胞在靶向肿瘤细胞的功能效果不同(如INF-γ和CD107a的分泌量不同，细胞杀伤率不同)，所以在CART细胞的产业化生产阶段需要一整套CART细胞的放行标准，才能保证病人获得合格的CART细胞用于回输来消灭体内的肿瘤细胞。CART细胞冻存液作为CART制剂的最终性质，它的检定是否完善决定着整个CART细胞质控的成功与否。

发明内容

针对以上原因，本发明提供了一套标准的检测CART细胞冻存液的检定方法，具体内容见下表。

表1 CART细胞冻存液安全性检测

本发明具有以下有益效果：

1)本发明操作简单，制备的CART安全性好,均一度高。

2)本发明的检测方法所用到的仪器都是实验室常规小型仪器，不需要大型仪器。

3)本发明的检测方法更易于推广，为CART的产业化生产奠定基础。

具体实施方式

实施例

本发明通过参考以下实验实施例进一步详细地进行描述。这些实施例仅出于说明性的目的提供，并不意欲为限制性的，除非另有规定。因此，本发明决不应被解释为限于以下实施例，而是应被解释为包括由于本文提供的教导变得显而易见的任何和全部的变化。本发明详述了几种特殊检测的实施方法，常规检测可参照中国药典的方法。

实施例1.检测细胞冻存液PH值

采用经计量合格的梅特勒FE20pH计，按照《梅特勒FE20pH计操作程序》进行病毒液pH值的检测。测定前，用预先放置至25℃的pH4.01缓冲液、pH7.00缓冲液和pH9.21缓冲液来校正仪器，校正后测定待测样品，重复测定3次。

实施例2.检测细胞冻存液渗透压