[发明专利]一种液质联用检测2;2;6;6-四甲基哌啶氮氧化物的方法

说明书

本发明公开一种液质联用检测2,2,6,6‑四甲基哌啶氮氧化物的方法，包括：步骤1)配制供试品溶液和对照品储备液；步骤2)取供试品溶液和一定浓度梯度的对照品储备液分别进样，用高效液相色谱‑质谱仪进行检测，记录色谱图；步骤3)对照品储备液的各质量浓度及色谱图峰面积进行线性回归分析，得回归方程和相关系数，制作出标准曲线；利用供试品溶液的色谱图中2,2,6,6‑四甲基哌啶氮氧化物的峰面积，按外标法计算获得2,2,6,6‑四甲基哌啶氮氧化物的含量。本发明提供的方法是本领域首次开发出的2,2,6,6‑四甲基哌啶氮氧化物的检测方法，该方法检测结果准确，灵敏度高，稳定性好，检测限低，完全满足本领域对基因毒性杂质的检测要求。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种采用液质联用技术检测药品中2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物含量的方法。

背景技术

2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物，化学名2,2,6,6-tetramethyl-1-piperidinyloxy(TEMPO)，是一种典型的哌啶类氮氧自由基，在化学、生物学、食品工业、农业等领域都有较为广泛的应用，主要作为催化剂合成药品以及医药中间体。在有机合成中，2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物能催化过氧化氢、氧气和次氯酸钠等绿色氧化剂在温和条件下将伯醇和仲醇定量氧化为醛和酮，该反应具有高选择性，将伯醇氧化为醛，不再氧化至羧酸，将仲醇氧化为酮，同时2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物自身被还原为2,2,6,6-四甲基哌啶基-1-醇。其结构式如下：

但是，基于结构毒性相关性理论，2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物属于潜在的基因毒性杂质，根据国际药品协调会议(ICH)关于基因毒性杂质的指导原则要求，基因毒性杂质严重威胁人类健康，一般使用被定义为毒理学关注阈值(TTC)的方法来评估基因毒性杂质在原料药中的可接受限度，而一个1.5μg/day的TTC值，即相当于每天摄入1.5μg的基因毒性杂质，被认为对于大多数药品来说是可以接受的风险(一生中致癌风险小于十万分之一)。按照这个阈值，可以根据预期的每日摄入量计算出原料药中可接受的基因毒性杂质水平。因此如果某种可能含有2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物的药品的日剂量为200mg，那么其TTC水平为7.5ppm,如果日剂量更高，那么TTC水平更低，因此需要建立一种快速、高效且高灵敏度的方法测定药品中2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物残留。目前尚未见文献报道该化合物的相关检测方法，由于2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物只有很弱的紫外吸收，采用高效液相-紫外检测器，由于条件缺陷，检测结果不准确，灵敏度低，在定量检测方面具有很大的局限性。而2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物越来越多的应用于有机合成中，鉴于此，急需建立一种操作简单，结果准确，灵敏度高，可用于药品及医药中间体中基因毒性杂质2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物残留含量的测定方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，克服现有技术的缺陷，提供一种具有操作简单、精密度好、回收率高、检测限低的特点的测定2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物含量的液质联用方法，可用于药品中基因毒性杂质2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物残留的质量控制。

为解决上述技术问题，本发明提供一种液质联用检测2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物的方法，用高效液相色谱-质谱仪进行检测，采用外标法定量法分析，具体包括以下步骤：

步骤1)配制供试品溶液和对照品储备液：以乙腈、水、抗坏血酸钠的混合液为溶剂，对待测样品进行溶解和定容，获得供试品溶液；以乙腈、水、抗坏血酸钠的混合液为溶剂，对2,2,6,6-四甲基哌啶氮氧化物标准品进行溶解和定容，配制得到一定浓度梯度的对照品储备液；

步骤2)取供试品溶液和一定浓度梯度的对照品储备液分别进样，用高效液相色谱-质谱仪进行检测，记录色谱图；其中，