[发明专利]一种细胞内支架，由其构造的质粒及质粒的应用

权利要求书

1.一种细胞内支架，其特征在于，包括DNA支架序列和TALE-目的分子融合蛋白；所述DNA支架序列包括结合序列BM1、结合序列BM2和结合序列BM3，所述TALE-目的分子融合蛋白包括TALE1-目的分子融合蛋白、TALE2-目的分子融合蛋白和TALE3-目的分子融合蛋白；所述TALE1-目的分子融合蛋白结合在结合序列BM1上，所述TALE2-目的分子融合蛋白结合在结合序列BM2上，所述TALE3-目的分子融合蛋白结合在结合序列BM3上；

所述结合序列BM1如SEQ ID NO.1所示、所述结合序列BM2如SEQ ID NO.2所示、所述结合序列BM3如SEQ ID NO.3所示；

所述TALE1-目的分子融合蛋白的编码序列为5’-TALE1的编码序列-ACTAGA-目的分子序列-3’；所述TALE1的编码序列如SEQ ID NO.4所示；

所述TALE2-目的分子融合蛋白的编码序列为5’-TALE2的编码序列-ACTAGA-目的分子序列-3’；所述TALE2的编码序列如SEQ ID NO.5所示；

所述TALE3-目的分子融合蛋白的编码序列为5’-TALE3的编码序列-ACTAGA-目的分子序列-3’；所述TALE3的编码序列如SEQ ID NO.6所示。

2.根据权利要求1所述的细胞内支架，其特征在于，所述结合序列BM1、结合序列BM2、结合序列BM3之间有6bp的间隔序列；

或，结合序列BM1、结合序列BM2、结合序列BM3之间有16bp的间隔序列。

3.根据权利要求1所述的细胞内支架，其特征在于，所述结合序列BM1、结合序列BM2、结合序列BM3的拷贝数比例为1∶1∶1、1∶2∶2或1∶2∶4；

和/或，所述结合序列BM1、结合序列BM2和结合序列BM3形成的支架单元重复四次。

4.根据权利要求1所述的细胞内支架，其特征在于，

所述TALE-目的分子融合蛋白中的目的分子为同一个目的分子，所述目的分子分别与TALE1、TALE2和TALE3融合得到TALE1-目的分子融合蛋白、TALE2-目的分子融合蛋白和TALE3-目的分子融合蛋白；

或，所述TALE-目的分子融合蛋白中的目的分子割裂成三部分：目的分子1、目的分子2和目的分子3，所述目的分子1、目的分子2和目的分子3分别与TALE1、TALE2和TALE3融合得到TALE1-目的分子1融合蛋白、TALE2-目的分子2融合蛋白和TALE3-目的分子3融合蛋白；

或，所述TALE-目的分子融合蛋白中目的分子为三种不同的目的分子：目的分子A、目的分子B和目的分子C；所述目的分子A、目的分子B和目的分子C分别与TALE1、TALE2和TALE3融合得到TALE1-目的分子A融合蛋白、TALE2-目的分子B融合蛋白和TALE3-目的分子C融合蛋白。

5.一种支架质粒，其特征在于，将权利要求1至4中任一项所述的细胞内支架中的DNA支架序列构建在pSB1C3、BBa_J63009或pSB4A5质粒上。

6.根据权利要求5所述的支架质粒，其特征在于，所述支架质粒的构建方法包括以下步骤：

(1)酶切pSC2载体质粒得到DNA支架序列；

(2)将DNA支架序列构建至pSB1C3、BBa_J63009或pSB4A5质粒骨架中。

7.一种表达质粒，其特征在于，将权利要求1至4中任一项所述的细胞内支架中的TALE-目的分子融合蛋白构建在pET28a(+)质粒上。