[发明专利]一种疟原虫核酸分型检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种疟原虫核酸分型检测试剂盒，其特征在于，包括：含有混合引物的PCR反应液I，含有分型探针的PCR反应液Ⅱ，Taq/UNG酶混合液，含有P.v、P.f、P.o、P.m线粒体cox3基因特定区域序列的重组质粒的阳性对照，阴性对照；所述混合引物包括：用于扩增P.v、P.f、P.o、P.m线粒体cox3基因特定区域的引物序列，用于扩增HBB基因的引物序列；所述分型探针包括：用于分型鉴定P.v、P.f、P.o、P.m线粒体cox3基因特定区域序列，用于鉴定HBB基因的探针序列。

2.根据权利要求1所述的一种疟原虫核酸分型检测试剂盒，其特征在于，PCR反应液I包括：水；

10×PCR buffer；

1-25mM Mg离子；

1-25mM dNTPs；

1-100μM P.v cox3基因上游引物VF：SEQ.ID.NO:1，CCTTACGTACTCTAGCTTTTA；

1-100μM P.v cox3基因下游引物VR：SEQ.ID.NO:2，GAGTTCTTTTTCTATTCAGAATAA；

1-50μM P.v cox3基因探针VP：SEQ.ID.NO:9，CAATATTATTGTCTATACTAGATACTATAGTT；

1-100μM P.f cox3基因上游引物FF：SEQ.ID.NO:3，CCTTACGTACTCTAGCTATGA；

1-100μM P.f cox3基因下游引物FR：SEQ.ID.NO:4，GAGTTCTTATTCTATTCAGAATAA；

1-50μM P.f cox3基因探针FP：SEQ.ID.NO:10，CAATTGTCTATTCGTACAATTATTCATATATATATTT；

1-50μM人HBB基因上游引物IF：SEQ.ID.NO:13，GAAAGTGCTCGGTGCCTTTAGT；

1-50μM人HBB基因下游引物IR：SEQ.ID.NO:14，CAGCTCACTCAGTGTGGCAAAG；

1-25μM人HBB基因探针IP：SEQ.ID.NO:15，ATGGCCTGGCTCACCTGGACAACC。

3.根据权利要求2所述的一种疟原虫核酸分型检测试剂盒，其特征在于，探针的末端使用荧光基团标记；所述P.v cox3基因探针VP的末端采用荧光集团标记，标记物为：FAM-BHQ1；所述M P.f cox3基因探针FP的末端采用荧光集团标记，标记物为：JOE-BHQ2；所述人HBB基因探针IP的末端采用荧光集团标记，标记物为：ROX-BHQ2。

4.根据权利要求1所述的一种疟原虫核酸分型检测试剂盒，其特征在于，PCR反应液Ⅱ包括：

水；

10×PCR buffer；

1-25mM Mg离子；

1-25mM dNTPs；

1-100μM P.o cox3基因上游引物OF：SEQ.ID.NO:5，CCTTACGTACTCTAGCTATTT；

1-100μM P.o cox3基因下游引物OR：SEQ.ID.NO:6，GAGTTCTTATTCTATTCTGAATAA；

1-50μM P.o cox3基因探针OP：SEQ.ID.NO:11，CAAACATAATATCGTCAAATATAAGTACTTTATTC；

1-100μM P.m cox3基因上游引物MF：SEQ.ID.NO:7，CCTTACGTACTCTAGCTTTGT；

1-100μM P.m cox3基因下游引物MR：SEQ.ID.NO:8，GAGTTCCTATTCTATTCAGAATAA；

1-50μM P.m cox3基因探针MP：SEQ.ID.NO:12，CAAATTAATTCGTCTACATTAGATACTATATTT；

1-50μM人HBB基因上游引物IF：SEQ.ID.NO:13，GAAAGTGCTCGGTGCCTTTAGT；

1-50μM人HBB基因下游引物IR：SEQ.ID.NO:14，CAGCTCACTCAGTGTGGCAAAG；

1-25μM人HBB基因探针IP：SEQ.ID.NO:15，ATGGCCTGGCTCACCTGGACAACC。