[发明专利]一种水稻黄单胞菌的环介导等温扩增检测引物组、检测方法和检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种水稻黄单胞菌的环介导等温扩增检测引物组、检测方法和检测试剂盒。本发明基于水稻黄单胞菌基因组特异性分子标记特征，通过比较基因组学方法，获得了水稻黄单胞菌保守的、特异性的DNA片段xcp，采用环介导等温扩增技术成功检测出带病水稻幼苗及种子，而且该检测方法快速、简单、高效。整个检测过程不需要特殊仪器，可在田间及实验室45‑90分钟内完成。该方法灵敏度高，可以检测低至含10个细菌的水稻材料，特异性好，其它病原菌及植物基因组不会对结果造成影响。该方法安全无害，没有有机试剂，没有核酸结合染料，所有试剂可以直接释放到环境中，可以对一切可能的病原菌传播源做检测。

技术领域：

本发明属于微生物检测领域，具体涉及一种水稻黄单胞菌的环介导等温扩增检测引物组、检测方法和检测试剂盒。

背景技术：

水稻(Oryza sativa)是世界上一半以上人口的主要粮食作物，其中大部分人口主要分布于发展中国家(韦淑亚等，2013)。中国是世界上人口最多的国家，且中国的水稻种植广泛，产量最多。水稻的产量对人们的生活影响重大，对社会经济的发展具有重要作用。据了解。在我国大约有60％以上的人以大米作为他们主要的粮食来源，这充分说明了水稻在人们生活中的重要作用。在我国，南方是水稻的主要种植场所，是我国大多数人们赖以生存的“粮仓”，同时也是该区农民经济来源的主要方面，推动经济发展。

粮食安全问题已成为全球性的重要问题。近年来，由于进口、天气、种植面积、病虫害等原因导致小麦和水稻等主要粮食价格大幅上涨。其中，病害是导致水稻减产的重要原因。到目前为止，仍未找到水稻病害有效的防控方法。这些病害主要包括真菌性和细菌性病害。真菌性病害包括：稻瘟病，损失可高达100％(Dean et al.,2005)；纹枯病，可造成水稻减产率高达50％(Zheng et al.,2013)；稻曲病，可造成水稻产量损失高达44％；褐斑病，曾于1942年引起孟加拉较大的饥荒，可造成水稻减产量最高可达到45％(Condon et al.,2013)等。

由细菌性病原菌引起的水稻病害主要包括：白叶枯病，由水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)引起，造成水稻减产量达(10％-50％)(Lee etal.,2005)；水稻细菌性条斑病，由细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)引起，可使水稻产量减产8％-32％(Bogdanove et al.,2011)。水稻黄单胞菌(Xanthomonas oryzae)包括水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)和细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)两个致病变种。

在细菌性和真菌性病原菌引起的水稻病害中，稻瘟病与白叶枯病是最严重的、最具毁灭性的两种水稻病害，且它们也是植物最重要的10种真菌和细菌疾病之一(Mansfieldet al.,2012)。由黄单胞菌引发的白叶枯病及条斑病每年给我国水稻生产造成严重的经济损失，带菌种子、种苗及腐烂植株是造成细菌病害爆发的重要原因，如何保证种子种苗的无菌特性是减少病害流行的主要因素。因此，在种子及种苗阶段检测是否带有病原菌将极大地减少病害发生。目前还没有特异、高效、简便的在田间快速检测病原菌的方法。

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种特异性强、高效、简便的水稻黄单胞菌的环介导等温扩增检测引物组、检测方法和检测试剂盒。

本发明的第一个目的是提供一种水稻黄单胞菌的环介导等温扩增检测引物组，所述的检测引物组如下所示：

FIP：5’-GGTGGACACCGAGGTGATCATCCGAGCAGTCGGACTACGT-3’(如SEQ ID NO.2所示)；

BIP：5’-GCGAGGACCGTCTGACCGAACGGCTGGAACGAATACTTGA-3’(如SEQ ID NO.3所示)；