[发明专利]一种黄花倒水莲愈伤组织的诱导方法

权利要求书

1.一种黄花倒水莲愈伤组织的诱导方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)外植体选择：以黄花倒水莲优树未萌发种子作为外植体，对该外植体进行清洗和消毒；

(2)萌发培养：将步骤(1)清洗和消毒过后的外植体置于萌发培养基中，于黑暗条件下25±2℃进行萌发培养29-32d，获得无菌苗，该萌发培养基以MS基本培养基为基础，添加蔗糖24-26g/L，琼脂6.8-7.2g/L，6-BA 0.95-1.05mg/L，NAA 0.48-0.51mg/L，pH＝5.75-5.86；

(3)增殖培养：切取步骤(1)获得的无菌苗的长为1～2cm的带节茎段，置于增殖培养基中进行增殖培养29-32d，以诱导无菌苗上形成更多的丛生芽，该增殖培养基以MS基本培养基为基础，添加蔗糖24-26g/L，琼脂6.8-7.2g/L，6-BA 0.95-1.05mg/L，NAA 0.19-0.21mg/L，pH＝5.75-5.86；上述增殖培养的条件为：光照强度为1200-2000LuX，光照时间12-16h/d，温度为25±2℃；

(4)茎段愈伤组织诱导培养：将经步骤(3)增殖培养的无菌苗切成0.5～1cm小段后，接入茎段愈伤诱导培养基中进行诱导培养29-32d，以获得茎段愈伤组织，该茎段愈伤诱导培养基以B5培养基为基础，添加蔗糖38-42g/L，琼脂5.8-6.2g/L，6-BA 0.48-0.53mg/L，NAA3.9-4.2mg/L，pH＝5.75-5.86；上述茎段愈伤组织诱导培养的条件为：光照强度为1200-2000LuX，光照时间8-12h/d，温度为25±2℃。

2.如权利要求1所述的诱导方法，其特征在于：所述萌发培养基以MS基本培养基为基础，添加蔗糖25g/L，琼脂7g/L，6-BA 1mg/L，NAA 0.5mg/L，pH＝5.8。

3.如权利要求1所述的诱导方法，其特征在于：所述增殖培养基以MS基本培养基为基础，添加蔗糖25g/L，琼脂7g/L，6-BA 1mg/L，NAA 0.2mg/L，pH＝5.8。

4.如权利要求1所述的诱导方法，其特征在于：所述茎段愈伤诱导培养基以B5培养基为基础，添加蔗糖40g/L，琼脂6g/L，6-BA 0.5mg/L，NAA 4mg/L，pH＝5.8。

5.一种黄花倒水莲愈伤组织的诱导方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)外植体选择：以黄花倒水莲优树未萌发种子作为外植体，对该外植体进行清洗和消毒；

(2)萌发培养：将步骤(1)清洗和消毒过后的外植体置于萌发培养基中，于黑暗条件下25±2℃进行萌发培养29-32d，获得无菌苗，该萌发培养基以MS基本培养基为基础，添加蔗糖24-26g/L，琼脂6.8-7.2g/L，6-BA 0.95-1.05mg/L，NAA 0.48-0.51mg/L，pH＝5.75-5.86；

(3)叶片愈伤组织诱导培养：将步骤(2)获得的无菌苗的苗叶切成0.48-0.51cm*0.48-0.51cm的小方块后，接入叶片愈伤诱导培养基中进行诱导培养29-32d，以获得叶片愈伤组织，该叶片愈伤诱导培养基以B5培养基为基础，添加蔗糖24-26g/L，琼脂5.8-6.2g/L，2，4-D3.8-4.1mg/L，NAA 0.48-0.53mg/L，pH＝5.75-5.86；上述茎段愈伤组织诱导培养的条件为：光照强度为1200-2000LuX，光照时间8-12h/d，温度为25±2℃。

6.如权利要求5所述的诱导方法，其特征在于：所述萌发培养基以MS基本培养基为基础，添加蔗糖25g/L，琼脂7g/L，6-BA 1mg/L，NAA 0.5mg/L，pH＝5.8。

7.如权利要求5所述的诱导方法，其特征在于：所述叶片愈伤诱导培养基以B5培养基为基础，添加蔗糖25g/L，琼脂6g/L，2，4-D 4mg/L，NAA 0.5mg/L，pH＝5.8。