[发明专利]一种黄花倒水莲愈伤组织的诱导方法

说明书

本发明公开了一种黄花倒水莲愈伤组织的诱导方法。本发明的诱导方法以黄花倒水莲优树未萌发种子作为外植体，获得最适宜的种子萌发培养和无菌苗增殖培养的培养基配方，筛选出了适宜无菌苗茎段和叶片愈伤组织诱导的培养基配方，为黄花倒水莲植物资源的替代来源研究及细胞悬浮培养获取有效次生代谢成分提供了科学依据，为后续的产业化开发研究奠定了基础。

技术领域

本发明属于植物栽培技术领域，具体涉及一种黄花倒水莲愈伤组织的诱导方法。

背景技术

黄花倒水莲(Polygala fallax Hemsl)属远志科(Polygalaceae)远志属(Polygala)落叶灌木，主要分布于湖南、广西、广东、福建和云南等地，是一种历史悠久的民间药物，以根或全草入药，味甘，微苦，性平。具有益气补血，健脾利湿，活血化瘀等功效，临床上用于病后体虚、腰膝酸痛、跌打损伤，脾虚水肿、月经不调等的治疗。黄花倒水莲主要含有皂苷、多糖、酮类、有机酸和氨基酸等多种活性物质，现代药理研究表明，其具有调节免疫、抗应激、抗衰老、抗氧化、活血降脂等作用，有比较广泛的应用前景和开发利用价值。黄花倒水莲人工种植主要以种子和扦插繁殖为主。但种子产量低，采收期短，采收困难；且野生资源有限，采种资源严重短缺；无性繁殖虽能快繁苗木，并保持其优良性状，但黄花倒水莲生长慢，植株分枝少，扦插繁殖材料有限；而组培苗繁殖成本高，移栽成活率低，生长周期长。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种黄花倒水莲愈伤组织的诱导方法。

本发明的技术方案如下：

一种黄花倒水莲愈伤组织的诱导方法，包括如下步骤：

(1)外植体选择：以黄花倒水莲优树未萌发种子作为外植体，对该外植体进行清洗和消毒；

(2)萌发培养：将步骤(1)清洗和消毒过后的外植体置于萌发培养基中，于黑暗条件下25±2℃进行萌发培养29-32d，获得无菌苗，该萌发培养基以MS基本培养基为基础，添加蔗糖24-26g/L，琼脂6.8-7.2g/L，6-BA 0.95-1.05mg/L，NAA 0.48-0.51mg/L，pH＝5.75-5.86；

(3)增殖培养：切取步骤(1)获得的无菌苗的长为1～2cm的带节茎段，置于增殖培养基中进行增殖培养29-32d，以诱导无菌苗上形成更多的丛生芽，该增殖培养基以MS基本培养基为基础，添加蔗糖24-26g/L，琼脂6.8-7.2g/L，6-BA 0.95-1.05mg/L，NAA 0.19-0.21mg/L，pH＝5.75-5.86；上述增殖培养的条件为：光照强度为1200-2000LuX，光照时间12-16h/d，温度为25±2℃；

(4)茎段愈伤组织诱导培养：将经步骤(3)增殖培养的无菌苗切成0.5～1cm小段后，接入茎段愈伤诱导培养基中进行诱导培养29-32d，以获得茎段愈伤组织，该茎段愈伤诱导培养基以B5培养基为基础，添加蔗糖38-42g/L，琼脂5.8-6.2g/L，6-BA 0.48-0.53mg/L，NAA 3.9-4.2mg/L，pH＝5.75-5.86；上述茎段愈伤组织诱导培养的条件为：光照强度为1200-2000LuX，光照时间8-12h/d，温度为25±2℃。

在本发明的一个优选实施方案中，所述萌发培养基以MS基本培养基为基础，添加蔗糖25g/L，琼脂7g/L，6-BA 1mg/L，NAA 0.5mg/L，pH＝5.8。

在本发明的一个优选实施方案中，所述增殖培养基以MS基本培养基为基础，添加蔗糖25g/L，琼脂7g/L，6-BA 1mg/L，NAA 0.2mg/L，pH＝5.8。

在本发明的一个优选实施方案中，所述茎段愈伤诱导培养基以B5培养基为基础，添加蔗糖40g/L，琼脂6g/L，6-BA 0.5mg/L，NAA 4mg/L，pH＝5.8。

本发明的另一技术方案如下：