[发明专利]一种无菌条件下牡丹胚高效生根的方法

权利要求书

1.一种无菌条件下牡丹胚高效生根的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

（1）选取花后100～150 d的牡丹种子，所述的牡丹种子选自耐湿热的‘凤丹’种子；

（2）将牡丹种子用流水冲洗干净后，置入杀菌剂溶液中浸泡5～15 min，蒸馏水冲洗，再置入400～600 mg·L^-1的GA溶液中浸泡15～30 h，收集下沉种子，蒸馏水冲洗干净后置于无菌容器中；

（3）在无菌环境下，将种子消毒处理，然后采用无菌水清洗3～8次；

（4）将消毒好的种子平铺在无菌的放有3～5层滤纸的培养皿中，用无菌修枝剪沿种脐剪开种子，无菌镊子取出种脐处的胚，接入备好的无激素培养基中，所述的无激素培养基的组成为1/2MS + 5 mM Ca²⁺；每瓶接种6～8个胚，接种后进行静置培养，培养条件：培养温度17℃，黑暗培养。

2.根据权利要求1所述无菌条件下牡丹胚高效生根的方法，其特征在于，步骤（1）中选取花后100～110 d的当年生牡丹种子。

3.根据权利要求1所述无菌条件下牡丹胚高效生根的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的杀菌剂溶液为800倍的多菌灵，浸泡时间为15 min。

4.根据权利要求1所述无菌条件下牡丹胚高效生根的方法，其特征在于，步骤（2）中GA溶液的浓度为500 mg·L^-1，浸泡时间为24 h。

5.根据权利要求1所述无菌条件下牡丹胚高效生根的方法，其特征在于，步骤（3）中所述的消毒处理为75%乙醇溶液消毒1～3 min，2%次氯酸钠溶液消毒3～8 min。

6.根据权利要求5所述无菌条件下牡丹胚高效生根的方法，其特征在于，步骤（3）中所述的消毒处理为75%乙醇溶液消毒1 min，2%次氯酸钠溶液消毒5 min。

7.根据权利要求1所述无菌条件下牡丹胚高效生根的方法，其特征在于，步骤（4）中所述的修枝剪和镊子的灭菌方式为：紫外线照射25-35 min，使用前用75%酒精擦拭并用酒精灯灭菌。