[发明专利]鉴别长梗黄精和多花黄精的特征序列、引物及方法

权利要求书

1.鉴别长梗黄精和多花黄精的分子特异性标记引物，所述引物序列如下：

上游引物891F2：5′-TTCGGTTGTAGTGGTGCTTG-3′，

下游引物891R2：5′-AGGCTTGTACAATAAATCTAGAAAC-3′。

2.一种利用权利要求1所述的分子特异性标记引物对长梗黄精和多花黄精进行快速区分的方法，所述方法为：提取待测黄精样本的基因组DNA作为模板，以所述分子特异性标记引物作为扩增引物，进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳检测，若电泳结果出现354 bp的DNA条带，则待测黄精样品为长梗黄精，若电泳结果未出现354 bp的DNA条带，则待测黄精样品为多花黄精；所述分子特异性标记引物序列为：

上游引物891F2：5′-TTCGGTTGTAGTGGTGCTTG-3′，

下游引物891R2：5′-AGGCTTGTACAATAAATCTAGAAAC-3′；

所述PCR扩增条件如下：94℃预变性6 min后；94℃变性40 s，53.5℃退火40 s，72℃延伸2 min，共35个循环；最后于72℃补平7 min，终止温度为4℃。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于所述方法如下：

（1）取待测黄精样品块茎洗净，切片，硅胶干燥，取适量加液氮磨碎，提取待测黄精样本块茎的基因组DNA；

（2）对步骤（1）获得的样品基因组DNA进行核酸纯度及浓度的检测，OD₂₆₀/OD₂₈₀1.8的DNA样品用于后续PCR扩增，并稀释基因组DNA浓度为20 ng/uL用于后续检测；

（3）以步骤（2）稀释的基因组DNA为模板，以所述分子特异性标记引物作为扩增引物，进行PCR扩增：

PCR反应体系每20 μL组成如下：

2×Power Taq PCR Master Mix 10 μL，

10μM上、下游引物 各1.5 μL，

20ng/μL模板DNA 3 μL，

ddH₂O补足至20 μL；

PCR反应条件如下：

94℃预变性6 min后；94℃变性40 s，53.5℃退火40 s，72℃延伸2 min，共35个循环；最后于72℃补平7 min，终止温度为4℃；

（4）取步骤（3）扩增产物4 μL，点样于1.5%的琼脂糖凝胶上，于1×TAE缓冲液中电泳20min，后于自动凝胶图像分析仪上照相；若电泳结果出现354 bp的DNA条带，则待测样品为长梗黄精，若电泳结果未出现354 bp的DNA条带，则待测黄精样品为多花黄精。