[发明专利]鉴别长梗黄精和多花黄精的特征序列、引物及方法

说明书

本发明涉及鉴别长梗黄精(Polygonatum filipe)和多花黄精(Polygonatum cyrtonema)的特征序列、特异性标记引物，以及快速鉴定的方法。所述特征序列如SEQ ID NO.1所示，所述引物序列如下：上游引物891F2：5′‑TTCGGTTGTAGTGGTGCTTG‑3′，下游引物891R2：5′‑AGGCTTGTACAATAAATCTAGAAAC‑3′。本发明特征序列和分子特异性标记引物可对长梗黄精和多花黄精进行快速的鉴别，方法简单、快捷、准确，是表观特征辨别长梗黄精和多花黄精所不能替代的分子手段。

(一)技术领域

本发明涉及鉴别长梗黄精(Polygonatum filipe)和多花黄精(Polygonatumcyrtonema)的特征序列、特异性标记引物，以及一种利用该引物对两者进行准确辨别的方法。

(二)背景技术

黄精，始载于《名医别录》，性味甘，平，归脾、肺、肾经。在临床上对治疗体倦乏力、脾胃气虚、肾虚亏损、肺虚燥咳、内热消渴、精血不足、须发早白、口干食少等有一定功效，有“血气双补之王”的美称，同时也可用于治疗肺结核、糖尿病、慢性肝炎等疾病，具有抗肿瘤、抗辐射等作用。黄精地下块茎富含多糖、皂苷、氨基酸、生物碱、微量元素等，具有很高的药用价值和食用价值。此外，黄精还可作为观赏植物开发利用。由此可见，黄精具有巨大的开发潜力和广阔的市场前景。

长梗黄精(P.filipe)和多花黄精(P.cyrtonema)均属于百合科黄精属的多年生草本植物，在形态上具有相似性，通常人们依据黄精叶片的长宽比，叶背有无短毛，花梗长度以及花丝上端是否膨大等形态学特征作为判别依据。由于生长环境、气候条件、土壤养分及生长年限等因素的影响，即使同一种黄精生长在不同地区其形态特征也会存在一定差异，因此形态鉴别往往缺乏准确性。此外，黄精块茎作为其药食同源的主要材料，均为结节状或连珠状膨大，其显微特征也极为相似，更不易直接被鉴别。与此同时，多花黄精被纳入《中国药典》，作为黄精药用的其中一种基源植物，而长梗黄精则未被列入其中，市场上易发生将长梗黄精混淆为多花黄精的现象，给黄精的市场秩序和药用安全性等带来了一定的隐患。因此，为区别两种不同来源的黄精药材，有必要对其鉴别方法进行研究。

目前，RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA，随机扩增多态性DNA)和ISSR(Inter-Simple Sequence Repeat，简单序列重复区间扩增多态性)分子标记技术已被用于黄精属植物的亲缘关系研究、种质资源鉴别和遗传多样性分析。这些分子标记技术均采用通用型引物，需要大量的引物筛选，且PCR扩增图谱的条带多，重复性较差，特异性不高。因此，只有发掘出可靠稳定的种特异性DNA指纹才能更有效地用于不同黄精种间的准确、快速鉴定。

(三)发明内容

本发明目的提供可鉴别长梗黄精和多花黄精的特征序列及分子特异性标记引物，以及一种利用该引物对这两种不同的黄精进行快速辨别的方法。

本发明采用的技术方案是：

鉴别长梗黄精(Polygonatum filipe)和多花黄精(Polygonatum cyrtonema)的特征序列，其序列如下：

5′-TTCGGTTGTAGTGGTGCTTGTTTGAGTGTGTTGGTTGCCGATGGTGGTACTGGGTTGGTGCTTATATTGTGGAGGTCTTTGTGTTTTGGTGGGGTTATGTGTGTTGGGAACATGGTTGGTGTTACAACGACTCTTGGATTTTGATGATAACAAAGTATTGTATATCTAACATATTCTTGCAGATTTATGTTACATATCTCATTGGCAACAATCAAGATATCAAGGATATATCAAAGACAAGGGTTTCAAGATTAATAGATGAAGTTACACAAGTCACTCCAAGCTTCAAGAAGAATTTATGCTTTGTAAAGTGATGTAATTTTATCTTTG TTTCTAGATT TATTGTACAA GCCT-3′。