[发明专利]条纹斑竹鲨免疫球蛋白新抗原受体可变区库引物及应用

说明书

本发明公开了条纹斑竹鲨免疫球蛋白新抗原受体可变区库引物及应用。本发明提供了成套引物，其包括引物组甲和引物组乙；所述引物组甲包括50条引物中的至少一条；所述50条引物分别为序列13所示的单链DNA分子或其衍生物至序列62所示的单链DNA分子或其衍生物；所述引物组乙包括42条引物中的至少一条；所述42条引物分别为序列63所示的单链DNA分子或其衍生物至序列104所示的单链DNA分子或其衍生物。本发明在条纹斑竹鲨的基因组上，发现了共4个IgNAR基因簇，并且通过本发明中的引物，能够扩增出全部基因簇所对应的vNAR序列。所以认为本发明中的引物能够扩增出完整的vNAR库序列。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种条纹斑竹鲨免疫球蛋白新抗原受体可变区库引物及应用。

背景技术

抗体可分为双链抗体与单链抗体。双链抗体,也称为传统抗体(VH)，它的单体是由四条肽链形成的对称结构，主要包括两条轻链和两条重链，重链和轻链之间由二硫键连接。双链抗体由于分子大、结构复杂、价格昂贵限制了它们的生产及在临床应用上的推广。

相对于传统抗体，在驼科动物和软骨鱼类中存在着天然的缺失轻链的纯重链抗体，其可变区被称为“纳米抗体”，具有分子量小、毒性低、组织渗透性强、溶解性好、易改造与表达的特点，它们能克服传统抗体的不足，并有望治疗更多的疾病，并大大降低抗体药物的生产成本。

鲨鱼和骆驼是两种能够产生纯重链抗体的物种，鲨鱼产生的重链抗体被称为免疫球蛋白新抗原受体(Ig new antigen receptor,IgNAR)，IgNAR是同型二聚体，其中每条链由五个恒定结构域，以及与抗原结合的可变结构域(vNAR)组成。由于鲨鱼抗体产生于高渗透压(约5倍于正常动物)和高蛋白变性(350mM的尿素)的环境中，因此比驼科抗体具有更高的稳定性。鲨鱼抗体的热稳定性在85摄氏度以上。并且，抗体领域的相关专利基本上都已经掌握在大型药企手中，但在利用鲨鱼进行抗体的制备方面，尚无专利壁垒，因此是一良好的契机。再者，众多的鲨鱼品种中，条纹斑竹鲨(Chiloscylliumplagiosum)不属于濒危鲨鱼种类，且体型小、易于人工繁养，最适合做抗体开发。

但是，目前条纹斑竹鲨的全基因组序列未知，对其免疫组库的研究较少，很大程度上限制了其纳米抗体的开发。针对条纹斑竹鲨vNAR的扩增，目前的文献仅报道了使用一对引物进行扩增，而该对引物是根据其它种类的鲨鱼设计的。由于鲨鱼vNAR基因序列的多样性，决定了仅用目前报道的引物进行免疫组库的扩增建库，必定会造成数据的损失。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种扩增条纹斑竹鲨免疫球蛋白新抗原受体可变区的成套引物。

本发明提供了成套引物，其包括引物组甲和引物组乙；

所述引物组甲包括50条引物中的至少一条；

所述50条引物分别为序列13所示的单链DNA分子或其衍生物至序列62所示的单链DNA分子或其衍生物；

所述引物组乙包括42条引物中的至少一条；

所述42条引物分别为序列63所示的单链DNA分子或其衍生物至序列104所示的单链DNA分子或其衍生物。

上述成套引物中，每条所述单链DNA分子的衍生物为将该条单链DNA分子的核苷酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与该条单链DNA分子具有相同功能的DNA分子。

上述成套引物中，所述引物组甲中的各条引物的配比均为等摩尔比；

和/或，所述引物组乙中的各条引物的配比均为等摩尔比；

上述成套引物中，所述引物组甲中一条引物与所述引物组乙中的一条引物的摩尔比为1：10-10：1；