[发明专利]同时检测牛流行热病毒和牛呼吸道合胞体病毒的双重实时荧光定量PCR的引物和探针

权利要求书

1.一种同时检测牛流行热病毒和牛呼吸道合胞体病毒的双重实时荧光定量PCR的引物，其特征在于，所述引物基于牛流行热病毒序列自5’端第3413～3518位碱基和牛呼吸道合胞体病毒序列自5’端第1847～1988位碱基作为检测序列设计得到。

2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于，用于检测牛流行热病毒的上游引物的核苷酸序列如SED ID NO：1所示或其衍生序列，用于检测牛流行热病毒的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示或其衍生序列；用于检测牛呼吸道合胞体病毒的上游引物的核苷酸序列如SED ID NO：3所示或其衍生序列，用于检测牛呼吸道合胞体病毒的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示或其衍生序列。

3.一种同时检测牛流行热病毒和牛呼吸道合胞体病毒的双重实时荧光定量PCR的TaqMan探针，其特征在于，所述TaqMan探针基于牛流行热病毒序列自5’端第3413～3518位碱基和牛呼吸道合胞体病毒序列自5’端第1847～1988位碱基作为检测序列设计得到。

4.根据权利要求3所述的TaqMan探针，其特征在于，用于检测牛流行热病毒的TaqMan探针的核苷酸序列如SED ID NO：5所示或其衍生序列，用于检测牛呼吸道合胞体病毒的TaqMan探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示或其衍生序列；所述探针经过荧光标记，其5’端标记有报告荧光基团，3’端标记有淬灭荧光基团。

5.根据权利要求4所述的TaqMan探针，其特征在于，所述用于检测牛流行热病毒的TaqMan探针的报告荧光基团为FAM，荧光淬灭基团为TAMRA；所述用于检测牛呼吸道合胞体病毒的TaqMan探针的报告荧光基团为ROX，荧光淬灭基团为BHQ2；并且所述探针的3’端经磷酸化处理。

6.一种同时检测牛流行热病毒和牛呼吸道合胞体病毒的双重实时荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包含权利要求1或2所述的引物和权利要求3或4所述的TaqMan探针。

7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包含以下用于25μL双重实时荧光定量PCR反应体系的试剂：实时荧光定量PCR反应液2×One step RT-PCRBufferⅢ 12.5μL，TaKaRa Ex Taq HS 0.5μL，Prime Script RT Enzyme MIXⅡ0.5μL，用于检测牛流行热病毒的上游引物(10μM)1μL，用于检测牛流行热病毒的下游引物(10μM)1μL，用于检测牛呼吸道合胞体病毒的上游引物(10μM)1μL，用于检测牛呼吸道合胞体病毒的下游引物(10μM)1μL，用于检测牛流行热病毒的TaqMan探针(10μM)0.75μL，用于检测牛呼吸道合胞体病毒的TaqMan探针(10μM)0.5μL，RNA-free H₂O 4.25μL。