[发明专利]一种使用单细胞打印机进行单细胞分选的方法

权利要求书

1.一种单细胞分选的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)样本准备：将传代培养的CHO-K1细胞离心5min，使用无菌Dulbecco's磷酸盐缓冲液或者传代培养基重悬，使细胞密度为1E6cells/mL；

2)单细胞打印机的液滴调整参数设置：启动单细胞打印机的液滴质量控制，设置触发延迟为3ms，深度为10μm，速度为120μm/ms；

3)单细胞打印机的分选参数设置：设置细胞直径12μm-18μm、细胞圆度55％-100％以及细胞检测半径为60μm；

4)分选：将单细胞打印机的墨盒中的细胞样本分选到孔板中，每孔分选1个细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中，再使用40μm的过滤器将重悬后的细胞悬液过滤，待用。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)之前，先启动单细胞打印机，待软件初始化完成，再启动液滴质量控制。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中，液滴质量控制的结果以图像的形式储存。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中，细胞检测半径为自动或者手动进行设置。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤4)中，墨盒中的细胞样本为10-80μL。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中，所述孔板为96孔板，预先每孔加入了100μL培养基。

8.如权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括评估单克隆率步骤：在孔板预先加入培养基后，使用Cell Metric单克隆细胞株分析仪扫描培养基，然后进行分选；待分选完成后，孔板静置使细胞充分沉降，再使用Cell Metric单克隆细胞株分析仪进行成像，以判断孔板每孔是否为单克隆；所述培养基为含乙醇的培养基。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述培养基为体积分数90％的传代培养基+体积分数10％的75％乙醇。

10.如权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括评估克隆恢复率步骤：待分选完成后，将细胞在二氧化碳培养箱静置培养，分别在2h、1天、2天、5天和9天后使用Cell Metric单克隆细胞株分析仪拍照，评估细胞的恢复情况。