[发明专利]一种使用Namocell单细胞分离仪进行单细胞分选的方法

权利要求书

1.一种单细胞分选的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)样本准备：将待分选的CHO-K1细胞用传代培养基稀释至1E5cells/mL的活细胞密度，加入钙黄绿素试剂至钙黄绿素终浓度为10nM，将细胞染色5分钟；染色完成后，使用传代培养基将细胞稀释至5000cells/mL，用于单细胞分选；

2)样品加载：启动Namocell单细胞分离仪，将步骤1)获得的细胞注入到芯片腔体中，然后加载待检测芯片，孔板托盘移动至芯片正下方来接受从喷嘴出来的液滴；

3)位置校准：调整激光光斑至微流体通道中心位置；

4)单细胞分选参数设置：设置荧光值为：FITCH＝500，FITCL＝30，PEH＝3，PEL＝0；

5)单细胞分选：开始分选单细胞，单细胞流在微流控通道中流过激光检测区域，对细胞进行识别，通过高速电子阀门精确捕获活性细胞，并最终形成1μL体积的液滴，分选至孔板中，每孔分选1个细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)之前，所述待分选的CHO-K1细胞先用细胞滤网过滤，然后使用细胞计数仪计数。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述钙黄绿素试剂为钙黄绿素的DMSO溶液，浓度为100μM。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中，细胞通过一次性的芯片上端加样孔，注入到芯片腔体中。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中，启动Namocell单细胞分离仪时，孔板托盘移动并且转回原位，气泵开启，废液管线端口有液滴流出。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5)中，所述孔板为96孔板，预先每孔加入了100μL培养基。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法还包括分选后细胞培养：待分选完成后，将细胞在二氧化碳培养箱静置培养，分别在2h、1天、2天、5天和9天后使用CellMetric单克隆细胞株分析仪拍照，待克隆生长恢复后，将克隆扩增，从而进行后续的筛选。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，二氧化碳培养箱的培养条件为36.5℃，6％CO₂。