[发明专利]一种使用HPLC测定中药一贯煎的指纹图谱方法

权利要求书

1.一种使用HPLC测定中药一贯煎的指纹图谱方法，其特征在于，包括以下步骤：以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂，以乙腈、甲醇中的一种或两种的混合物为流动相A，以甲酸水溶液、乙酸水溶液、磷酸水溶液中的一种为流动相B，对一贯煎试样溶液进行梯度洗脱，然后采用DAD检测器进行检测。

2.根据权利要求1所述使用HPLC测定中药一贯煎的指纹图谱方法，其特征在于，色谱柱内径为4.6mm,色谱柱柱长为250mm。

3.根据权利要求1或2所述使用HPLC测定中药一贯煎的指纹图谱方法，其特征在于，十八烷基硅烷键合硅胶的粒径为2-10μm；优选地，十八烷基硅烷键合硅胶的粒径为5μm。

4.根据权利要求1-3中任一项所述使用HPLC测定中药一贯煎的指纹图谱方法，其特征在于，选用乙腈为流动相A。

5.根据权利要求1-4中任一项所述使用HPLC测定中药一贯煎的指纹图谱方法，其特征在于，流动相B中，甲酸水溶液的体积浓度为0.01％-1.5％，乙酸水溶液的体积浓度为0.01％-1.5％，磷酸水溶液的体积浓度为0.01％-1.5％。

6.根据权利要求1-5中任一项所述使用HPLC测定中药一贯煎的指纹图谱方法，其特征在于，梯度洗脱过程中，流速为0.5-1.5ml/min，柱温为20-40℃；优选地，梯度洗脱过程中，流速为1.0ml/min，柱温为25℃。

7.根据权利要求1-6中任一项所述使用HPLC测定中药一贯煎的指纹图谱方法，其特征在于，梯度洗脱过程中，流动相A、流动相B的比例变化为：0-10min，A相2％，B相98％；10-90min，A相12％，B相88％；90-120min，A相15％，B相85％；120-125min，A相35％，B相65％；125-135min，A相65％，B相35％；135-140min，A相95％，B相5％；140-150min，A相2％，B相98％。

8.根据权利要求1-7中任一项所述使用HPLC测定中药一贯煎的指纹图谱方法，其特征在于，检测时检测波长为310-320nm；优选地，检测时检测波长为316nm。

9.根据权利要求1-8中任一项所述使用HPLC测定中药一贯煎的指纹图谱方法，其特征在于，一贯煎试样溶液的进样量为8-12μL；优选地，一贯煎试样溶液的进样量为10μL。

10.根据权利要求1-9中任一项所述使用HPLC测定中药一贯煎的指纹图谱方法，其特征在于，一贯煎试样溶液按以下工艺进行制备：在一贯煎干膏粉中加入甲醇，超声10-20min，放冷，滤过，得到一贯煎试样溶液；优选地，在一贯煎干膏粉中加入甲醇，超声10-20min，放冷，滤过，然后将滤液水浴蒸干，加入体积浓度为75-85％的甲醇水溶液溶解，摇匀滤过，得到一贯煎试样溶液。